ინფორმაცია

შეუძლიათ თუ არა ფერომონებს რთული ორგანიზმის ფენოტიპში ცვლილებების გააქტიურება?


მე ვიცი, რომ ფერომონები ერთსა და იმავე სახეობას შორის კომუნიკაციის საშუალებაა, მაგრამ შეუძლიათ თუ არა მათ შეცვალონ ორგანიზმის ფენოტიპი, შეიძლება გავლენა იქონიოს აღნიშნული ორგანიზმის გენების გამოხატულებაზე.


ფერომონები არის კომუნიკაციის საშუალება ცალკეულ სახეობას შორის და არა სახეობებს შორის.

[ა] რე [ფერომონებს] რომელსაც შეუძლია შეცვალოს ორგანიზმის ფენოტიპი [?]

დიახ! ის რეალურად აუცილებლად აკეთებს, განსაზღვრებით. თუ ინდივიდის მიერ წარმოებული ქიმიური ნივთიერება არ ახდენს გავლენას ფენოტიპზე ერთი და იმავე სახეობის რომელიმე ინდივიდზე, მაშინ ის არ არის ფერომონი! თქვენ შეამჩნევთ, რომ ქცევა არის ორგანიზმის ფენოტიპის ნაწილი.

ფერომონებს შეუძლიათ მკვეთრი გავლენა მოახდინონ ორგანიზმის ფენოტიპზე. ყველაზე თვალსაჩინო მაგალითებია სოციალური მწერებისგან, როგორიცაა კასტების დიფერენციაცია ტერმიტებში (მაცუურა და სხვ. 2010).


მოზაიკა (გენეტიკა)

მოზაიზმი ან გენეტიკური მოზაიზმი არის მდგომარეობა მრავალუჯრედულ ორგანიზმში, რომელშიც ერთ ორგანიზმს აქვს ერთზე მეტი გენეტიკური ხაზი გენეტიკური მუტაციის შედეგად. [1] [2] ეს ნიშნავს, რომ სხვადასხვა გენეტიკური ხაზი წარმოიშვა ერთი განაყოფიერებული კვერცხუჯრედის შედეგად. გენეტიკური მოზაიკა ხშირად შეიძლება დაბნეული იყოს ქიმერიზმთან, რომელშიც ორი ან მეტი გენოტიპი წარმოიქმნება ერთ ინდივიდში, ისევე როგორც მოზაიზმი. ქიმერიზმში, თუმცა, ორი გენოტიპი წარმოიქმნება ემბრიონის განვითარების ადრეულ სტადიაზე ერთზე მეტი განაყოფიერებული ზიგოტის შერწყმისგან, ვიდრე მუტაციის ან ქრომოსომის დაკარგვისგან.

გენეტიკური მოზაიზმი შეიძლება გამოწვეული იყოს მრავალი განსხვავებული მექანიზმით, მათ შორის ქრომოსომის არაერთობლიობით, ანაფაზური ჩამორჩენით და ენდორესპლიკაციით. [3] ანაფაზის ჩამორჩენა არის ყველაზე გავრცელებული გზა, რომლის საშუალებითაც მოზაიზმი წარმოიქმნება პრეიმპლანტაციის ემბრიონში. [3] მოზაიზმი ასევე შეიძლება განვითარდეს ერთ უჯრედში მუტაციის შედეგად, ამ შემთხვევაში მუტაცია გადაეცემა მხოლოდ მის ქალიშვილ უჯრედებს (და იქნება მხოლოდ მოზრდილ უჯრედებში). [4] სომატური მოზაიზმი საერთოდ არ არის მემკვიდრეობითი, რადგან ის საერთოდ არ მოქმედებს სასქესო უჯრედებზე. [2]


Აბსტრაქტული

მიკრობული წარმოების მასპინძლების ზრდის მახასიათებლები და მეტაბოლიზმი გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს მეტაბოლური გზით დამუშავებული გზების პროდუქტიულობას. ზრდის პარალელურად წარმოება ხშირად იწვევს ნახშირბადის ბიომასის/ბიოპროდუქტების კონკურენციას. ზრდის შეჩერების ფენოტიპი ასოცირდება Saccharomyces cerevisiae ფერომონ-რეაგირება პოტენციურად მიმზიდველი წარმოების ფაზაა, რადგან ის იძლევა წარმოების პოპულაციის ზრდის გამოყოფის შესაძლებლობას. თუმცა, ცოტა რამ არის ცნობილი ფერომონ-რეაქციასთან დაკავშირებული მეტაბოლური ფენოტიპის შესახებ, რომელიც არ არის შემოწმებული ვარგისიანობისთვის, როგორც წარმოების ფაზა. უჯრედული მეტაბოლიტების ნაკადების ანალიზი, არსებული ტრანსკრიპტომიული მონაცემები და ჰეტეროლოგიური ნაერთების წარმოება (პარაჰიდროქსიბენზოინის მჟავა) აჩვენებს, რომ ფერომონ-პასუხის საფუძველია უაღრესად აქტიური და განსხვავებული მეტაბოლიზმი. ეს შედეგები მიუთითებს იმაზე, რომ ფერომონ-რეაქცია არის შესაფერისი წარმოების ეტაპი და ის შეიძლება იყოს სასარგებლო სინთეზური ბიოლოგიის დიზაინის პრინციპების ინფორმირებისათვის პროდუქტიული სტაციონარული ფაზის ფენოტიპების საინჟინროდ.


15 - ფენოტიპური პლასტიურობის რეგულირება ევოლუციური განვითარების ბიოლოგიის თვალსაზრისით

ფენოტიპური პლასტიურობა არის ორგანიზმის უნარი შეცვალოს თავისი ფენოტიპი გარემოს ცვლილებების საპასუხოდ. პრაქტიკულად ნებისმიერ თვისებას აქვს პოტენციალი გამოავლინოს ფენოტიპური პლასტიურობა, მაგრამ პლასტიურობის გამოხატვის ხარისხი ბუნებრივი შერჩევით არის ფორმირებული. ნაჩვენებია, რომ ფენოტიპური პლასტიურობა მნიშვნელოვან როლს ასრულებს ადაპტირებული ევოლუციის დროს. კერძოდ, განვითარების პლასტიურობამ, ორგანიზმის უნარმა შეცვალოს განვითარების ტრაექტორია მკაფიო გარემო პირობებში, შეიძლება მნიშვნელოვანი როლი შეასრულოს ახალი ფენოტიპების ევოლუციის დროს. ამრიგად, მექანიზმების გააზრება, რომლებიც არეგულირებენ განვითარების პლასტიურობას, გვაწვდიან ინფორმაციას ორგანიზმების ევოლუციის შესახებ.


ბიოლოგიის ბოგგარტები: როგორ გავლენას ახდენს გენეტიკური ცვლილებები გენოტიპზე

მოსაზრება, რომ არსებობს გენოტიპიდან ფენოტიპზე ერთ – ერთი რუქა, დიდი ხნის წინ გადატრიალდა. გენოტიპთან და გარემოსთან ერთად, "არა გენეტიკური ცვლილებები", რომლებიც ორგანიზებულია შეცვლილი რნმ-ისა და ცილის მოლეკულებით, ასევე ხელმძღვანელობს ფენოტიპის განვითარებას. იდეა, რომ არსებობს მარშრუტი, რომლის მეშვეობითაც ფენოტიპის ცვლილებებმა შეიძლება გამოიწვიოს გენოტიპის ცვლილებები, გავლენას ახდენს მოლეკულური, განვითარების, ევოლუციური და გამოყენებითი ინტერესის რამდენიმე ფენომენზე. ფენოტიპური ცვლილებები, რომლებიც არ ცვლის დნმ-ის თანმიმდევრობას, შესწავლილია მოდელის სისტემებში (მაგ .: დნმ და ჰისტონის ცვლილებები, რნმ-ის რედაქტირება, პრიონის წარმოქმნა) და ცნობილია, რომ მნიშვნელოვან როლს ასრულებს მოკლევადიან ადაპტაციაში. თუმცა, მათი გარდამავალი ხასიათისა და არასტაბილური მემკვიდრეობის გამო, გრძელვადიანი ევოლუციის ამგვარი ცვლილებების როლი საკამათო რჩება. მე ვაჯგუფებ და განვიხილავ სამ გზას, რომლითაც არა-გენეტიკურმა ცვლილებებმა შეიძლება გავლენა მოახდინოს გენოტიპზე და გავლენა მოახდინოს უჯრედების ფიტნესზე თაობებზე, აქცენტი გაკეთდეს მიმზიდველ იდეაზე, რომ ისინი შეიძლება მოქმედებდნენ როგორც გენეტიკური ადაპტაციის საფეხურები. მე ფოკუსირებული ვარ მიკრობული სისტემების მუშაობაზე და ვცდილობ გამოვყო ბოლოდროინდელი ექსპერიმენტები და მოდელები, რომლებიც ამ იდეას ემყარება. საერთო ჯამში, მე განვიხილავ მტკიცებულებებს, რომლებიც მიანიშნებს იმაზე, რომ არა გენეტიკურმა ცვლილებებმა შეიძლება გავლენა მოახდინოს ფენოტიპზე გენოტიპზე გავლენის გზით და ამით როლი შეასრულოს ევოლუციურ ცვლილებებში.

ეს არის ხელმოწერის შინაარსის გადახედვა, თქვენი დაწესებულების საშუალებით წვდომა.


IV. დიკარიონის განვითარება: bE/bW კომპლექსი სამსახურში

მას შემდეგ, რაც უჯრედები გაერთიანდება, შედეგად მიღებული დიკარიონის ბედი დამოკიდებულია პროდუქტებზე შეჯვარების ტიპის ლოკუსი. მხოლოდ უჯრედები, რომლებიც შეიცავს ალელის სხვადასხვა ალელს ლოკუსებს შეუძლიათ შექმნან სტაბილური დიკარიონი (Banuett & Herskowitz, 1994b). ვინაიდან განვითარების შემდგომი საფეხურებისათვის დიკარიონი დამოკიდებულია მასპინძელ მცენარეზე ლოკუსი შეიძლება ჩაითვალოს მოლეკულურ გადამრთველად საპროფიტულიდან ბიოტროფიულ ცხოვრების სტილზე გადასვლისთვის.

BE და bW ჰომეოდომენის პროტეინები კოდირებული მიერ ლოკუსი დიმერირდება, როდესაც ისინი სხვადასხვა ალელისგან მომდინარეობენ და სწორედ ეს ჰეტეროდიმერი აკონტროლებს განვითარების ყველა შემდგომ საფეხურს (კემპერი და სხვები., 1995). BE/bW კომპლექსი უკავშირდება დნმ -ის კონსერვატიულ მოტივს, რომელსაც ეწოდება ბბს ზედა დინების რეგიონში მგრძნობიარე გენები (Romeis და სხვები., 2000 ბრახმანი და სხვები., 2001). დიფერენციალური ტექნიკისა და კანდიდატური გენის გამოყენებით 20 დადგენილია რეგულირებული გენები (ბოლმანი და სხვები., 1994 წ. შოუვეკერი და სხვები., 1995 ურბანული და სხვები., 1996 ბ ბრახმანი და სხვები., 2001, სურ. 3). აქედან მხოლოდ სამი აღმოჩნდა პირდაპირი სამიზნე (რომის და სხვები., 2000 ბრახმანი და სხვები., 2001, G. Weinzierl & J. Kämper, გამოუქვეყნებელი, სურ. 3) ვარაუდობს, რომ უმრავლესობა კონტროლირებადი გენები ირიბად რეგულირდება. ამ საფუძვლების მიხედვით, შემოთავაზებულია, რომ bE/bW ჰეტეროდიმერი იწვევს მარეგულირებელ კასკადს, რომლის ერთი ან მეტი მარეგულირებელი გენი უშუალო სამიზნეა (სურათი 3). დიფერენციალური ანალიზიდან რიცხვი დადგენილია, რომ რეგულირებადი გენები დაახლოებით 140 -ია, ხოლო ახალი ანალიზების გამოყენებით U. maydis დნმ -ის მასივებმა განაპირობა 246 -ის იდენტიფიკაცია რეგულირებადი გენები (მ. შეერი და ჯ. კუმპერი, გამოუქვეყნებელი). BE/bW ჰეტეროდიმერი არის დაავადების კონტროლის ცენტრალური ადგილი, შეიძლება ვივარაუდოთ, რომ ამ გენებიდან ბევრი მნიშვნელოვან როლს შეასრულებს პათოგენურობის დროს. ეს მოლოდინი მცდარი აღმოჩნდა 11 -ისთვის აქამდე გაანალიზებული რეგულირებული გენები MAP კინაზას კოდირების გენით kpp6 იყო ერთადერთი გამონაკლისი (ბრახმანი და სხვები., 2003, ნახაზი 3). ერთი ახსნა ისაა უჯრედის კედლის სტრუქტურისათვის საჭირო რეგულირებული გენები, როგორიცაა repellent Rep1 (Wösten და სხვები., 1996) და ჰიდროფობინი Hum2 (ბოლმანი და სხვები., 1994) ან უჯრედის კედლის შემქმნელი ფერმენტები, როგორიცაა პოტენციური ეგზოხიტინაზა Exc1 (ბრახმანი და სხვები., 2001) და ენდოგლუკანაზა EG1 (შოუვეკერი და სხვები., 1995) არიან გენის ოჯახების წევრები, რომლებსაც შეიძლება ჰქონდეთ ზედმეტი ფუნქციები (სურ. 3). გარდა ამისა, b ჰეტეროდიმერის მიერ წამოწყებული კომპლექსური პროგრამა, ალბათ, უნდა განვასხვავოთ სხვადასხვა დარგებად (სურ. 3), რომლებიც ყველა არ უნდა ეხებოდეს პათოგენურობას. ახლა გამოწვევაა სავარაუდო მარეგულირებელი კასკადის კვანძების იდენტიფიცირება, რადგან ეს გვპირდება ცალკეულ გზებსა და მათთან დაკავშირებულ ფუნქციებს. გამოწვეული ძაფები.

მოდელი დამოკიდებული მარეგულირებელი კასკადი. 1 კლასის გენები პირდაპირ რეგულირდება bE/bW ჰეტეროდიმერის შეკავშირებით ბბს ( სავალდებულო თანმიმდევრობა) ყუთები პრომოუტერულ რეგიონებში. მე -2 კლასის გენები ირიბად რეგულირდება ჯერ კიდევ დაუდგენელი მარეგულირებელი ცილების საშუალებით, რომლებიც კოდირებულია 1 კლასის გენებით. გამოწვეული გენები გამოსახულია ლურჯ ფერში, წითელი ფერის რეპრესირებული გენები. *მიუთითებს, რომ წაშლილი მუტანტები წარმოიქმნა. გარდა kpp6, არცერთი ეს გენი არ არის აუცილებელი პათოგენურობისათვის. პროდუქტები დამოკიდებულ გენებს აქვთ შემდეგი ფუნქციები (ყოფილი სახელები მოცემულია ფრჩხილებში, ჰიპოთეტური ფუნქციები მითითებულია H): polX (frb52): დნმ პოლიმერაზა X H dik6: არავითარი მსგავსება lga2: არავითარი მსგავსება egl1: ენდოგლუკანაზა dik1: არავითარი მსგავსება rep1: საზიზღარი hum1: ჰიდროფობინი pdi1 (frb23): ცილის დისულფიდ იზომერაზა H kpp6: MAPK აღგზნ 1 (frb133): ეგზოხიტინაზა H frb63: უცნობი ant1 (frb172): K + /H + ანტიპორტერი H pma1 (frb323): პლაზმური მემბრანა ATPase H atr1 (frb34): აცილ ტრანსფერაზა H frb110: უცნობი (ჰომოლოგია პოტენციური პოლიპეპტიდისგან Neurospora crassa) cap1 (frb136) უცნობი, ჰომოლოგია კაფსულის ასოცირებული ცილისგან კრიპტოკოკები ნეოფორმანები, frb124: უცნობი mfa1/2: ფერომონის წინამორბედი pra1/2: ფერომონის რეცეპტორი (ბოლმანი და სხვები., 1994 წ. შოუვეკერი და სხვები., 1995 ურბანული და სხვები., 1996a, b Wösten და სხვები., 1996 ბრახმანი და სხვები., 2001, 2003 ).


Soskine, M. & amp Tawfik, D. S. მუტაციური ეფექტები და ახალი ცილის ფუნქციების ევოლუცია. ნათ. მეუფე გენე. 11, 572–582 (2010).

Tracewell, C. A. & amp არნოლდი, F. H. მიმართული ფერმენტის ევოლუცია: ფიტნესზე ასვლა პიკს ერთ ამინომჟავას ერთდროულად. კურრი მოსაზრება. ქიმიის ბიოლი 13, 3–9 (2009).

Liang, J., Kim, J. R., Boock, J. T., Mansell, T. J. & amp Ostermeier, M. Ligand სავალდებულო და allostery შეიძლება წარმოიშვას ერთდროულად. პროტეინის მეცნიერება. 16, 929–937 (2007).

ბრაუნი, S. D. & amp Babbitt, P. C. ახალი შეხედულებები ფერმენტების ევოლუციის შესახებ თანმიმდევრობისა და სტრუქტურის ურთიერთობების ფართომასშტაბიანი კვლევებიდან. ჯ ბიოლი. ქიმიის 289, 30221–30228 (2014).

Dean, A. M. & amp Thornton, J. W. მექანიკური მიდგომები ევოლუციის შესწავლაში: ფუნქციური სინთეზი. ნათ. მეუფე გენე. 8, 675–688 (2007).

Yu, R. C. et al. უარყოფითი გამოხმაურება, რომელიც აუმჯობესებს ინფორმაციის გადაცემას საფუარის სიგნალში. Ბუნება 456, 755–761 (2008).

Yamada, T. & amp Bork, P. ბიომოლეკულური ქსელების ევოლუცია - მეტაბოლური და ცილოვანი ურთიერთქმედების გაკვეთილები. ნათ. მეუფე მოლ. უჯრედის ბიოლი. 10, 791–803 (2009).

როგევი, ა. და სხვები. ფუნქციონალური მოდულების კონსერვაცია და გადატვირთვა გამოვლენილია ეპისტაზის რუქით დაშლის საფუარში. მეცნიერება 322, 405–410 (2008).

რაიანი, C. J. et al. იერარქიული მოდულარულობა და გენეტიკური ურთიერთქმედების ევოლუცია სახეობებში. მოლი უჯრედი 46, 691–704 (2012).

Capra, E. J. & amp Laub, M. T. ორი კომპონენტის სიგნალის გადაცემის სისტემების ევოლუცია. ანუუ. მეუფე მიკრობიოლი. 66, 325–347 (2012).

Zarrinpar, A., Park, S. H. & amp Lim, W. A. ​​ფიჭური ცილების ურთიერთქმედების ქსელში სპეციფიკის ოპტიმიზაცია უარყოფითი შერჩევით. Ბუნება 426, 676–680 (2003).

ბულჯანი, მ და სხვები. უწესრიგო სეგმენტების ქსოვილის სპეციფიკური შეხამება, რომელიც აყალიბებს სავალდებულო მოტივებს, აჯანსაღებს ცილების ურთიერთქმედების ქსელებს. მოლი უჯრედი 46, 871–883 (2012).

ლინჩი, ვ. ჯ., მეი, გ. & ვაგნერი, გ. პ. მარეგულირებელი ევოლუცია ტრანსკრიფციის ფაქტორში CEBPB- ის ფოსფოქრომის დივერგენციის გზით. Ბუნება 480, 383 – U139 (2011).

პეისაჟოვიჩი, ს. გ., გარბარინო, ჯ. ე., ვეი, პ. და ამპ ლიმი, ვ. ა. მეცნიერება 328, 368–372 (2010).

ლაი, ა., სატო, პ. მ. & Amp. პეისახოვიჩი, ს. გ. სინთეზური სასიგნალო ხარაჩების ევოლუცია მოდულური ცილის დომენების რეკომბინაციით. ACS Synth. ბიოლი 4, 714–722 (2015).

Sato, P. M., Yoganathan, K., Jung, J. H. & amp Peisajovich, S. G. სიგნალიზაციის კომპლექსის სიმტკიცე დომენის გადაჯგუფებისათვის ხელს უწყობს ქსელის ევოლუციას. PLoS ბიოლ. 12, e1002012 (2014).

დი რობერტო, რ. ბ. & პეისახოვიჩი, ს. გ. დომენის შეცვლის როლი სასიგნალო ქსელების ევოლუციაში. ჯ Exp. ზოოლი. ბ მოლ დევ. ევოლუცია. 322, 65–72 (2014).

ბარდველი, ლ საფუარის შეჯვარების ფერომონის საპასუხო გზა. პეპტიდები 26, 339–350 (2005).

Widmann, C., Gibson, S., Jarpe, M. B. & amp Johnson, G. L. Mitogen გააქტიურებული ცილის კინაზა: სამი კინაზას მოდულის კონსერვაცია საფუარიდან ადამიანამდე. ფიზიოლი მეუფე 79, 143–180 (1999).

Hepler, J. R. განვითარებადი როლები RGS ცილების უჯრედულ სიგნალში. ტენდენციები ფარმაკოლი. მეცნიერება 20, 376–382 (1999).

Hislop, J. N. & amp von Zastrow, M. ubiquitination- ის როლი G- ცილებთან დაკავშირებული რეცეპტორების ენდოციტურ ტრეფიკინგში. ტრაფიკი 12, 137–148 (2011).

ბალონი, დრ უჯრედი 126, 1079–1093 (2006).

Hicke, L., Zanolari, B. & amp Riezman, H. ალფა-ფაქტორის რეცეპტორის ციტოპლაზმური კუდის ფოსფორილირება საჭიროა მისი ყოვლისმომცველი და ინტერნალიზაციისათვის. ჯ. უჯრე ბიოლი. 141, 349–358 (1998).

Howard, J. P., Hutton, J. L., Olson, J. M. & amp Payne, G. S. Sla1p ემსახურება როგორც სამიზნე სიგნალის ამოცნობის ფაქტორს NPFX (1,2) D- შუამავლობით ენდოციტოზისთვის. ჯ. უჯრე ბიოლი. 157, 315–326 (2002).

Tan, P. K., Davis, N. G., Sprague, G. F. & amp Payne, G. S. Clathrin ხელს უწყობს შვიდი ტრანსმემბრანული სეგმენტის რეცეპტორების ინტერნალიზაციას საფუარში ფერომონების შესაწყვილებლად. ჯ. უჯრე ბიოლი. 123, 1707–1716 (1993).

Yesilaltay, A. & amp Jenness, D. D. საფუარის ალფა-ფაქტორი ფერომონის რეცეპტორის ჰომო-ოლიგომერული კომპლექსები ენდოციტოზის ფუნქციური ერთეულებია. მოლი ბიოლი უჯრედი 11, 2873–2884 (2000).

ბაშორი, C. J., Helman, N. C., Yan, S. D. & amp Lim, W.A. მეცნიერება 319, 1539–1543 (2008).

Terrell, J., Shih, S., Dunn, R. & amp Hicke, L. ფუნქცია მონოვიკვიტინაციისთვის G ცილის შერეული რეცეპტორის ინტერნალიზაციაში. მოლი უჯრედი 1, 193–202 (1998).

ვეინერი, J. L., Guttierezsteil, C. & amp Blumer, K. J. საფუარში რეცეპტორ-G პროტეინის შეწყვილების დარღვევა ხელს უწყობს Sst2 დამოკიდებული ადაპტაციის გზის ფუნქციონირებას. ჯ ბიოლი. ქიმიის 268, 8070–8077 (1993).

უდინი, მ. ს., კიმი, ჰ., დეიო, ა., ნაიდერი, ფ. ჯ.რეცეპტი. სიგ. გადაცემული 32, 65–75 (2012).

Marsh, L. ჩანაცვლებილება saccharomyces-cerevisiae- ს ალფა-ფაქტორის რეცეპტორის ჰიდროფობიურ ბირთვში იძლევა პასუხს saccharomyces-kluyveri ალფა-ფაქტორზე და ანტაგონისტზე. მოლი უჯრედი. ბიოლი 12, 3959–3966 (1992).

Lin, J. C., Parrish, W., Eilers, M., Smith, S. O. & amp Konopka, J. B. არომატული ნარჩენები ტრანსმემბრანული დომენების 5 და 6 ექსტრაცელულურ ბოლოებში ხელს უწყობს G პროტეინთან დაკავშირებული ალფა-ფაქტორის რეცეპტორის ლიგანდის გააქტიურებას. ბიოქიმია 42, 293–301 (2003).

სტეფანი, C. J. & amp Blumer, K. J. საფუარის G ცილის შემცველი რეცეპტორის მესამე ციტოპლაზმური მარყუჟი აკონტროლებს გზის გააქტიურებას, ლიგანდის დისკრიმინაციას და რეცეპტორების ინტერნალიზაციას. მოლი უჯრედი. ბიოლი 14, 3339–3349 (1994).

აბელი, მ. გ., ლი, ბ. კ., ნაიდერი, ფ. ბიოქიმია. ბიოფიზი. აქტა 1448, 12–26 (1998).

Lin, J. C., Duell, K., Saracino, M. & amp Konopka, J. B. ნარჩენების იდენტიფიცირება, რომლებიც ხელს უწყობენ რეცეპტორების გააქტიურებას G პროტეინთან დაკავშირებულ ალფა-ფაქტორ რეცეპტორში კომპენსატორული მუტაციების ანალიზის გზით. ბიოქიმია 44, 1278–1287 (2005).

Lee, B. K., Khare, S., Naider, F. & amp Becker, J. M. Saccharomyces cerevisiae G პროტეინთან დაკავშირებული რეცეპტორის ნარჩენების იდენტიფიცირება, რაც ხელს უწყობს ალფა-ფაქტორის ფერომონის შეკავშირებას. ჯ ბიოლი. ქიმიის 276, 37950–37961 (2001).

Parrish, W., Eilers, M., Ying, W. W. & amp Konopka, J. B. ტრანსმემბრანული დომენის 3 ციტოპლაზმური დასასრული არეგულირებს Saccharomyces cerevisiae G- პროტეინთან დაკავშირებული ალფა-ფაქტორის რეცეპტორების მოქმედებას. გენეტიკა 160, 429–443 (2002).

Sommers, C. M., Martin, N. P., Akal-Strader, A., Becker, J. M., Naider, F. & amp Dumont, M. E. მუტაციების შეზღუდული სპექტრი იწვევს საფუარის ალფა-ფაქტორის რეცეპტორის კონსტიტუციურ გააქტიურებას. ბიოქიმია 39, 6898–6909 (2000).

Sommers, C. M. & amp Dumont, M. E. გენეტიკური ურთიერთქმედება G პროტეინთან დაკავშირებული რეცეპტორის ტრანსმემბრანულ სეგმენტებს შორის დაშიფრული საფუარის STE2 გენის მიერ. ჯ. მოლი ბიოლი 266, 559–575 (1997).

Aharoni, A., Gaidukov, L., Khersonsky, O., Gould, S. M., Roodveldt, C. & amp Tawfik, D. S. პროვოცირებული ცილის ფუნქციების "ევოლუცია". ნათ. გენეტიკური. 37, 73–76 (2005).

Matsumura, I. & amp Ellington, A. D. In vitro ბეტა-გლუკურონიდაზას ევოლუცია ბეტა-გალაქტოზიდაზაში მიმდინარეობს არასპეციფიკური შუალედებით. ჯ. მოლი ბიოლი 305, 331–339 (2001).

Khersonsky, O., Roodveldt, C. & amp Tawfik, D. S. Enzyme promiscuity: ევოლუციური და მექანიკური ასპექტები. კურრი მოსაზრება. ქიმიის ბიოლი 10, 498–508 (2006).

Carroll, S. M., Bridgham, J. T. & amp Thornton, J. W. ჰორმონების სიგნალის ევოლუცია ელასმობრანქებში პრომისკულური რეცეპტორების ექსპლუატაციით. მოლი ბიოლი ევოლუცია. 25, 2643–2652 (2008).

მათე, ე და სხვები. ფლუორესცენტური აგონისტებისა და ანტაგონისტების დიფერენციალური ურთიერთქმედება საფუარის გ ცილასთან დაწყვილებულ რეცეპტორთან Ste2p. ჯ. მოლი ბიოლი 409, 513–528 (2011).

Son, C. D., Sargsyan, H., Naider, F. & amp Becker, J. M. Saccharomyces cerevisiae α- ფაქტორი ფერომონის რეცეპტორის ლიგანდების შემკვრელი რეგიონების იდენტიფიკაცია ფოტოსამყაროს ჯვარედინი კავშირით. ბიოქიმია 43, 13193–13203 (2004).

Babu, M. M., Kriwacki, R. W. & amp Pappu, R. V. Versatility from protein disorder. მეცნიერება 337, 1460–1461 (2012).

პრილუსკი, ჯ. Et al. FoldIndex ((გ)): მარტივი ინსტრუმენტი იმის დასადგენად, არის თუ არა ცილის მოცემული თანმიმდევრობა შინაგანად გახსნილი. ბიოინფორმატიკა 21, 3435–3438 (2005).

კროგი, ა., ლარსონი, ბ., ფონ ჰეინი, გ. ჯ. მოლი ბიოლი 305, 567–580 (2001).

რენეკე, J. E., Blumer, K.J., Courchesne, W. E. & amp Thorner, J. საფუარის ალფა-ფაქტორის რეცეპტორის კარბოქსი-ტერმინალური სეგმენტი არის მარეგულირებელი სფერო. უჯრედი 55, 221–234 (1988).

ალვარო, C. G. et al. სპეციფიური ალფა-დაპრესტინები უარყოფითად არეგულირებენ saccharomyces cerevisiae ფერომონულ პასუხს G- ცილებთან შერეული რეცეპტორების Ste2- ის შემცირებით. მოლი უჯრედი. ბიოლი 34, 2660–2681 (2014).

ნაკამურა, Y., Takemoto, N., Ishii, J. & amp; Kondo, A. ერთდროული მეთოდი საფუარში G- პროტეინთან დაკავშირებული რეცეპტორის დიმერიზაციისა და სიგნალიზაციის ანალიზისათვის ორმაგი ფერის რეპორტიორთა სისტემით. ბიოტექნოლი. ბიოენგი. 111, 586–596 (2014).

Hao, N., Yildirim, N., Wang, Y. Q., Elston, T. C. & amp Dohlman, H. G. რეგულატორები G ცილის სიგნალიზაციისა და სიგნალის გარდამავალი გააქტიურება - ექსპერიმენტული და გამოთვლითი ანალიზი ცხადყოფს G ცილის აქტივობის უარყოფით და დადებით უკუკავშირს. ჯ ბიოლი. ქიმიის 278, 46506–46515 (2003).

Konopka, J. B., Jenness, D. D. & amp Hartwell, L. H. C-terminus of S-cerevisiae alpha-pheromone receptor ndërmjetებს ადაპტაციურ პასუხს ფერომონზე. უჯრედი 54, 609–620 (1988).

შაჰ, ა. & Amp მარშ, ლ. როლი Sst2- ში G ცილებთან დაკავშირებული რეცეპტორების სიგნალის მოდულირებაში. ბიოქიმია. ბიოფიზი. რეზ. კომუნი. 226, 242–246 (1996).

Wiley, H. S. & amp Cunningham, D. D. სტაბილური მდგომარეობის მოდელი უჯრედული შეკავშირების, პოლიპეპტიდური ლიგანდების ინტერნალიზაციისა და დეგრადაციის გასაანალიზებლად. უჯრედი 25, 433–440 (1981).

Dixit, G., Kelley, J. B., Houser, J. R., Elston, T. C. & amp Dohlman, H. G. ფიჭური ხმაურის ჩახშობა G ცილის სიგნალიზაციის Sst2 რეგულატორის მიერ. მოლი უჯრედი 55, 85–96 (2014).

Morell, M., Espargaro, A., Aviles, F. X. & amp Ventura, S. in vivo ცილის ურთიერთქმედების შესწავლა და შერჩევა ბიმოლეკულური ფლუორესცენციის კომპლემენტის და ნაკადის ციტომეტრიის დაწყვილებით. ნათ. პროტოკი. 3, 22–33 (2008).

Nagai, T., Ibata, K., Park, E. S., Kubota, M., Mikoshiba, K. & amp Miyawaki, A. ყვითელი ფლუორესცენტური ცილის ვარიანტი უჯრედულ-ბიოლოგიური გამოყენებისთვის სწრაფი და ეფექტური მომწიფებით. ნათ. ბიოტექნოლი. 20, 87–90 (2002).

Vallier, L. G., Segall, J. E. & amp Snyder, M. ალფა-ფაქტორის რეცეპტორი C- ტერმინი მნიშვნელოვანია შესატყვისი პროექციის ფორმირებისა და ორიენტაციისათვის Saccharomyces cerevisiae. უჯრედის მოტილი. ციტოსკლეონი 53, 251–266 (2002).

Rogers David, W., Denton Jai, A., McConnell, E. & amp Greig, D. სახეობების ამოცნობის ექსპერიმენტული ევოლუცია. კურრი ბიოლი 25, 1753–1758 (2015).

Kelley, J. B., Dixit, G., Sheetz, J. B., Venkatapurapu, S. P., Elston, T. C. & amp; Dohlman, H. G. კურრი ბიოლი 25, 275–285 (2015).

კიმ, ჰ., ლი, ბ. კ., ნაიდერი, ფ. & ამპე ბეკერი, ჯ. მ. სპეციფიკური ტრანსმემბრანული ნარჩენების იდენტიფიცირება და ლიგანდებში გამოწვეული ინტერფეისის ცვლილებები, რომლებიც მონაწილეობენ საფუარის G პროტეინთან დაკავშირებული რეცეპტორის ჰომოდიმერულ წარმოქმნაში. ბიოქიმია 48, 10976–10987 (2009).

Marcet-Houben, M. & amp Gabaldon, T. Beyond the Whole-Genome Duplication: Phylogenetic Evidence for Ancient Interspecies Hybridization in Baker საფუარის შთამომავლობა. პლოს ბიოლი 13, e1002220 (2015).

ფლოკი, თ და სხვები. უნივერსალური ალოსტერული მექანიზმი G ალფა გააქტიურებისათვის GPCR– ით. Ბუნება 524, 173–179 (2015).

Venkatakrishnan, A. J., Deupi, X., Lebon, G., Tate, C. G., Schertler, G. F. & amp Babu, M. M. მოლეკულური ხელმოწერები G- პროტეინთან დაკავშირებული რეცეპტორების. Ბუნება 494, 185–194 (2013).

Bockaert, J., Marin, P., Dumuis, A. & amp Fagni, L. G პროტეინთან დაკავშირებული რეცეპტორების "ჯადოსნური კუდი": გამაგრება ფუნქციური ცილის ქსელებისთვის. ფებს ლეტ 546, 65–72 (2003).

მარკოვიჩი, დ. & Amp. Challiss, R. A. J. ალტერნატიული შერწყმა G ცილებთან ერთად რეცეპტორებთან: ფიზიოლოგია და პათოფიზიოლოგია. უჯრედის მოლი სიცოცხლის მეცნიერება. 66, 3337–3352 (2009).

Kilpartick, G. J., Dautzenberg, F. M., Martin, G. R. & amp Eglen, R. M. 7TM receptors: splicing on the cake. ტენდენციები ფარმაკოლი. მეცნიერება 20, 294–301 (1999).

დინგი, F. X., Lee, B. K., Hauser, M., Davenport, L., Becker, J. M. & amp Naider, F. Saccharomyces cerevisiae ალფა-შეჯვარების ფაქტორის რეცეპტორის სავალდებულო დომენის შემოწმება ფლუორესცენტური ლიგანდებით. ბიოქიმია 40, 1102–1108 (2001).

ალცკული, ს.ფ. და სხვ. Gapped BLAST და PSI-BLAST: ცილების მონაცემთა ბაზის ახალი თაობის ძებნის პროგრამები. ნუკლეინის მჟავების რეზ. 25, 3389–3402 (1997).


ტრანსგენური თაგვის მოდელი წამლებით გამოწვეული კასპაზა 8-ით მინიმალური p16 პრომოტორული ელემენტის კონტროლით, რომელიც აქტიურია დაბერებულ უჯრედებში, რათა მოხდეს p16- გამომხატველი დაბერების უჯრედების შერჩევითი აღმოფხვრა.

ტრანსგენური თაგვის მოდელი გამოხატავს ტრიმოდალურ რეპორტიორს წითელი ფლუორესცენტური ცილის, ლუციფერაზას და ჰერპეს სიმპლექსის ვირუსის ტიმიდინ კინაზას p16 პრომოუტერის კონტროლის ქვეშ, რაც საშუალებას მისცემს თვალყური ადევნოს და აღმოფხვრას p16 გამომხატველი დაბერების უჯრედები.

ნიკოტინამიდის დინუკლეოტიდი (NAD +)-დამოკიდებული დეაცილაზები, რომლებიც არეგულირებენ უჯრედულ პროცესებს, მათ შორის დნმ – ის შეკეთებას, ანთებას, მეტაბოლიზმს და დაბერებას.

მიტოქონდრიულ დისფუნქციასთან დაკავშირებული დაბერება

(MiDAS). მიტოქონდრიული დაზიანება იწვევს დაბერებას მკაფიო სეკრეტორული ფენოტიპით, რომელსაც არ გააჩნია IL-1 დამოკიდებული ანთება.

ენდოსომური განყოფილების მიერ წარმოებული უჯრედული ბუშტუკები, რომლებიც ჩართულია უჯრედშორისი კომუნიკაციაში.

არაჰისტონის მოლეკულები, რომლებიც აკავშირებენ დნმ-ს და გავლენას ახდენენ ქრომატინის შეკუმშვაზე.

ასაკობრივი პროპორციული ზრდა მიელოიდურ უჯრედებში სხვა წარმოშობის ხარჯზე, როგორც ეს აღინიშნება ძვლის ტვინსა და სისხლში.

ნეირონებში ნაპოვნი ცილა, რომელიც მნიშვნელოვანია აქსონებში მიკროტუბულების სტრუქტურის შესანარჩუნებლად. მუტანტები და ჰიპერფოსფორილირებული ფორმები გვხვდება სხვადასხვა ნეიროდეგენერაციულ დაავადებებში, მათ შორის ალცჰეიმერის დაავადებაში.

უჯრედული მატრიცის პათოლოგიური დაგროვება დაავადებების ქსოვილში, რომელიც ზღუდავს ქსოვილის ნორმალურ ფუნქციონირებას და იწვევს ქსოვილების ხანგრძლივ შეშინებას.

ხელს უწყობს LDL უჯრედებში შეყვანას. ამ რეცეპტორის კოდირების გენის მუტაციები ათეროსკლეროზის განვითარების წინაპირობაა.

ლინზების დაბინდვა თვალში იწვევს მკაფიო ხედვის შეუძლებლობას. ქირურგიული ჩარევა დაავადებული ლინზების შესაცვლელად არის გავრცელებული სამედიცინო პროცედურა ხანდაზმულ ადამიანებში.

ზურგის არანორმალური მრუდი, რომელიც შეინიშნება როგორც ლაბორატორიულ თაგვებში, ასევე ადამიანებში.

ცხიმოვანი ქსოვილის არანორმალური განაწილება სხეულში, შეიძლება ეხებოდეს როგორც გადაჭარბებულ, ისე არასაკმარის დეპონირებას.

მოლეკულური ჩაპერონი, რომელიც ხელს უწყობს ცილების სათანადო დასაკეცს და დეგრადაციას, რაც ასევე ხელს უწყობს სითბოს სტრესის გამძლეობას.

ნაერთები, რომლებიც მეტაბოლიზდება აქტიურ წამლად, რათა შეცვალონ პრეპარატის ბიოშეღწევადობა და აქტივობა.

ფორების ფორმირების ცილა გამოხატული ციტოტოქსიკურ T უჯრედებში და ბუნებრივ მკვლელ უჯრედებში. როდესაც ეს უჯრედები ახდენენ ციტოტოქსიკურობას, ისინი გამოყოფენ პერფორინის შემცველ გრანულებს, რომელიც უერთდება სამიზნე უჯრედის მემბრანას და ქმნის ფორებს სამიზნე უჯრედზე, რათა მოხდეს ციტოტოქსიკურობა.

ქიმერული ანტიგენის რეცეპტორების T (CAR T) უჯრედები

T უჯრედები, რომლებიც გენეტიკურად იქნა შემუშავებული T უჯრედის რეცეპტორის გამოსახატავად, შეიქმნა განსაზღვრული სამიზნეების დასაკავშირებლად, რათა აღმოფხვრას უჯრედები, რომლებსაც აქვთ სამიზნე მათ გარსზე.

უჯრედის ზედაპირზე გამოხატული ცილა, რომელიც აფერხებს იმუნური სისტემის უნარს დამიზნოს უჯრედები, რომლებიც გამოხატავს ცილას. PD1– ის ურთიერთქმედების დათრგუნვა მის ლიგანდთან არის ძლიერი იმუნოთერაპიის მიდგომა.


შედეგები

Pas1 + გენის იზოლაცია

უჯრედის ციკლის დაწყების მაკონტროლებელი მექანიზმის გასაგებად, ჩვენ შევეცადეთ გამოგვეყო ახალი ფაქტორები, რომლებიც ფუნქციურად ურთიერთქმედებდა Res-Cdc10p-Rep ტრანსკრიპციული მარეგულირებელი კომპლექსებით. ამ მიზნით, ჩვენ ვეძებთ მულტიკოპირულ დამთრგუნველებს უუნარობის შესახებres1 ნულოვანი მუტანტი (Δres 1) უჯრედის ციკლის დასაწყებად 21 ° C ტემპერატურაზე (ტანაკა და სხვები, 1992). რათა თავიდან ავიცილოთ განმეორებითი იზოლირება ცნობილი მრავალკოპიანი ჩამხშობიres1 + , res2 + ,rep1 + , რეპ 2 +, და cdc18 + (ტანაკა და სხვები, 1992 კელი და სხვები, 1993 წ მიამიტო და სხვები, 1994 სუგიამა და სხვები, 1994 წ ნაკაშიმა და სხვები, 1995), ჩვენ გამოვიყენეთ ს. პომბე ჰინიdIII- მონელებული გენომური დნმ ბიბლიოთეკა, რადგან ყველა ცნობილი ჩამხშობი გარდაcdc18 + შეიცავ მინიმუმ ერთსჰინdIII მათი კოდირების რეგიონში და, შესაბამისად, მოსალოდნელი იყო მათი აღმოფხვრა ამ ბიბლიოთეკიდან. ტრანსფექციისა და შერჩევის შემდეგ, 71 აქტიური პლაზმიდის კლონი იქნა ამოღებული E. coliრა როგორც მოსალოდნელი იყო, აღდგენილი კლონების უმეტესობა იყოcdc18 + თუმცა, ორი აქტიური კლონი, H40 და H49, არ ჰიბრიდიზებულა არცერთ ჩახშობის გენთან. შეზღუდვის რუქა და ჰიბრიდიზაციის ანალიზი აჩვენებს, რომ ორივე კლონი შეიცავს საერთო 2.8 კბ-ს ჰინdIII ფრაგმენტი დამთრგუნველი აქტივობით (სურათი 1). ქვეკლონირების და ჩახშობის ანალიზმა ცხადყო, რომ 1.8 კბ ჰინdIII–საკმე ფრაგმენტი მქონდა აქტიურობა. ამ ფრაგმენტის გენი დასახელდაpas1 + (Pcl– ის მსგავსი ციკლინი დაწყების გასააქტიურებლად იხილეთ ქვემოთ) და ახასიათებს შემდგომ. ეს თავიდან იზოლირებული იყოpas1 + გენი ამოჭრილია პრომოუტერის რეგიონში, ამიტომ გენომური ფრაგმენტი მთელს მოიცავსpas1 + გენი იზოლირებული იქნა კოლონიის ჰიბრიდიზაციით (სურათი 1A).

ნახ. 1. იზოლაცია pas1 + გენი. (ა) შეზღუდვის რუკა pas1 + გენი. თეთრი და შავი ისრები მიუთითებს მის მიმართულებას და მოცულობას pas1 + ORF დაpas1 + cDNA, შესაბამისად. ქვეკლონების უნარი ჩაახშოს Δres1 მუტანტი ნაჩვენებია + ან - მარჯვენა სვეტში. სტრუქტურა 7 კბსფმე ფრაგმენტი გამოიყენება დარღვევისათვისpas1 + გენი ნაჩვენებია ბოლოში. (ბ) ჩახშობა Δres1 დაΔრეპ 2 მუტანტები მეტისმეტი გამოხატვითpas1 + გენი. ისΔres1 (K156-D1) დაΔრეპ 2 (N3-141S) მუტანტები გარდაიქმნა მითითებული პლაზმიდებით, გავრცელდა MMA ფირფიტებზე და ინკუბაცია მითითებულ ტემპერატურაზე. pAL-pas1– ს აქვს ჩანართი თავდაპირველად იზოლირებული 2.8 კბ ჰინdIII ფრაგმენტი. pAL-X არის pALSK + ვექტორი ჩანართის გარეშე და გამოიყენება როგორც უარყოფითი კონტროლი.

როგორც ზემოთ აღინიშნა, რეპ 2 ნულოვანი მუტანტი (Δrep2) უჯრედები ნაწილობრივ კომპრომეტირებულია უჯრედული ციკლის დაწყების უნარში, რადგან არააქტიური Res2p-Cdc10p კომპლექსები კონკურენციას უწევს აქტიურ Res1p-Cdc10p– ს MCB– სთან შეკავშირებისთვის, რითაც აფერხებს MCB– ის გააქტიურებას (ნაკაშიმა და სხვები, 1995). ზრდის დეფექტი Δrep2 უჯრედები აშკარა ხდება დაბალ ტემპერატურაზე და 18 ° C ტემპერატურაზე მუტანტი აჩერებს გ1რა ზრდის ეს დეფექტი ასევე გადაარჩინა გამოხატვის საშუალებით pas1 + (სურათი 1B, ქვედა პანელები).

Pas1 + გენი აკოდირებს ცილოვან ჰომოლოგს Pho85– თან დაკავშირებულ ციკლინებთან

სტრუქტურის გასარკვევადpas1 + დაშიფრული ცილა, cDNA კლონი, რომელიც მოიცავს მთელ კოდირების რეგიონს, იყო იზოლირებული და თანმიმდევრული. მისი ნუკლეოტიდური თანმიმდევრობა და სავარაუდო Pas1 ცილის გამოტანილი ამინომჟავის თანმიმდევრობა ნაჩვენებია ნახატზე 2A. სავარაუდო Pas1 ცილა შედგება 411 ამინომჟავისგან, გამოთვლილი მოლეკულური მასით 45 kDa. ამინომჟავის ჰომოლოგიის ძიებამ გამოავლინა, რომ Pas1p იზიარებს შეზღუდულ, მაგრამ მნიშვნელოვან ჰომოლოგიას Pho85 კინაზასთან ასოცირებულ ციკლინებთან (Pcls) S. cerevisiae ციკლინის ყუთში (სურათი 2C). ამინომჟავის იდენტურობა Pas1p და Pcl1p შორის ამ რეგიონში არის 28%. გარდა ამისა, Pas1p შეიცავს ორი ტიპიური PEST მდიდარი თანმიმდევრობას, რომლებიც გვხვდება ბევრ გ1ციკლინები და ითვლება, რომ ემსახურება პროტეოლიზური დეგრადაციის სიგნალს (სურათი 2B). ის pas1 mRNA კონსტიტუციურად გამოიხატებოდა უჯრედების ციკლის დროს და უცვლელი დარჩა უჯრედებშიcdc10 + , res1 +, და რეპ 2 + (ჩვენი გამოუქვეყნებელი შედეგები), რაც მიუთითებს ამაზე pas1 + არ არის ტრანსკრიპციული რეგულირების სამიზნე Res-Cdc10p-Rep კომპლექსების მიერ.

ნახ. 2. Pas1 ცილის პირველადი სტრუქტურა. (ა) ნუკლეოტიდი და პროგნოზირებული ამინომჟავების თანმიმდევრობაpas1 + cDNA. ამინომჟავების თანმიმდევრობა ნაჩვენებია დნმ-ის თანმიმდევრობის ქვემოთ ერთ ასოზე. ნუკლეოტიდების ნუმერაცია იწყება პროგნოზირებული ATG– ის დაწყებითpas1 + მთარგმნელობითი პროდუქტი. (ბ) Pas1 ცილის სქემა. ციკლინის ყუთის ჰომოლოგიური რეგიონი ნაჩვენებია შავად, ხოლო ორი PEST- ით მდიდარი დომენი ნაცრისფერში. (C) ამინომჟავის ჰომოლოგია ციკლინის ყუთში და მის დინების რეგიონში Pas1p, Pcl1p (Hcs26p) (Ogasდა სხვები, 1991), Pcl2p (OrfDp) (ფროლიხი და სხვები, 1991), Pcl5p, Pcl9p (შუა დღე და სხვები, 1997) და Pho80p (Toh-e and Shimauchi, 1986). ამინომჟავები, რომლებშიც Pas1p იდენტურია დანარჩენი ხუთი ციკლინისა, ნაჩვენებია შავად.

Pas1 + საჭიროა სრული cdc18 + mRNA ინდუქციისთვის

შეისწავლოს მოქმედების მექანიზმი და ფიზიოლოგიური როლი pas1 +, ჩვენ ავაშენეთ უჯრედები, რომლებსაც აკლიაpas1 + გენი ერთსაფეხურიანი გენის შემცვლელებით ura4 + გენი (სურათი 1A). ტრანსფექციის შემდეგ, დიპლოიდური უჯრედები წაიშალა ერთზეpas1 + ალელი გამოვლინდა Southern blot– ის ანალიზით და გამოიწვია მეიოზმა ჰაპლოიდური გამანადგურებელი სპორების მისაღებად. ჰაპლოიდური უჯრედები აკლია pas1 + (Δpas1) რომ სპორებიდან აღმოცენებული სიცოცხლისუნარიანი იყო და კარგად მრავლდებოდა. შესაძლო მეორე მუტაციის აღმოსაფხვრელად, ისინი რამდენჯერმე გადაიკვეთა ველური ტიპის შტამი ფართო ანალიზამდე. გამრავლების შესაძლებლობებში,Δpas1 უჯრედები გარეული ტიპის უჯრედების მსგავსი იყო ყველა კვების პირობებში და 18-26 ° C ტემპერატურაზე. ერთადერთი შესამჩნევი განსხვავება ის იყო, რომ გამანადგურებელი მიდრეკილი იყო დაეკავებინა უჯრედების ოდნავ დაბალი სიმკვრივე, როდესაც გაიზარდა შესართავამდე.

ზემოაღნიშნული უნარი pas1 + გ1 ფენოტიპების დაპატიმრებაΔres 1 და Δrep2 მუტანტები ვარაუდობენ, რომ Pas1p ააქტიურებს Res-Cdc10p-Rep კომპლექსს (ებ) ს ან G- სთვის საჭირო ფაქტორს (ფაქტორებს)1-S გადასვლა, მაგრამ არ არის დაკავშირებული Res-Cdc10p-Rep ტრანსკრიპციული კონტროლის სისტემასთან. პირველი, რომ განვასხვავოთ ეს ორი შესაძლებლობა, ჩვენ გამოვიკვლიეთ წაშლა pas1 + იმოქმედა ტრანსკრიპტის დონეზე cdc18 +, ძირითადი სამიზნე გენი რეგულირდება Res-Cdc10p-Rep. ის Δpas1 უჯრედები სინქრონიზებული იყო G- სთან1 აზოტით შიმშილით და შემდეგ გათავისუფლებულია უჯრედის ციკლის დასაწყებად აზოტით მდიდარ ზრდის გარემოში. უჯრედები იკრიფებოდა ყოველ 30 წუთში დაcdc18 + ტრანსკრიპტი ნახევრად რაოდენობრივი იყო ჩრდილოეთ ჰიბრიდიზაციით. იმ Δpas1 უჯრედები, გამოწვეული რაოდენობის cdc18 + ტრანსკრიპტი შემცირდა ველური ტიპის უჯრედების დონის დაახლოებით 50% -მდე. მაგრამ იგი დაუბრუნდა ველური ტიპის უჯრედის დონეს ქრომოსომული ინტეგრაციის შედეგად, ერთი ასლის pas1 + გენი (სურათი 3, A და B). ამის საპირისპიროდ, ჩანაწერი cdc2 + გენი, რომელიც არ იყო რეგულირებული Res-Cdc10p-Rep– ით და ამიტომ გამოიყენებოდა როგორც უარყოფითი კონტროლი, უცვლელი იყო ყოფნა-არყოფნითpas1 + (სურათი 3, C და D). გარდა ამისა, ზედმეტი გამოხატვის pas1 + მასშიΔres 1 უჯრედები ჩახშობილია არა მხოლოდ გ1 არამედ შემცირებაcdc18 + mRNA დონე შეზღუდვის ტემპერატურაზე (ჩვენი გამოუქვეყნებელი შედეგები). ეს შედეგები მიუთითებს იმაზე, რომ Pas1 ციკლინი ააქტიურებს MCB- ზე დამოკიდებულ ტრანსკრიპციას, რომელიც შესრულებულია Res-Cdc10-Rep.

ნახ. 3 pas1 + საჭიროა სრულად cdc18 + mRNA ინდუქცია. (ა)cdc18 + ტრანსკრიპტი სრულად არ არის გამოწვეული გ1-S გადასვლაΔpas1 მუტანტი ველური ტიპი (EV3A),Δpas1 (K182-A7) დაΔpas1+ pas1 + (Δpas1ავსებს pas1 + გენის ინტეგრაცია) (K182-A7-P1) უჯრედები გაიზარდა შუალედურ ფაზაში 30 ° C ტემპერატურაზე MM (+ N/2%G) და შემდეგ აზოტით შიმშილი MM- ში (−N/2%G) 48 საათის განმავლობაში დააპატიმრონ გ1რა შემდეგ უჯრედები გაათავისუფლეს MM– ში (+N/2%G) 30 ° C ტემპერატურაზე. უჯრედის ნაწილები მიიღებოდა ყოველ 30 წუთში დაcdc18 + გამოხატულება შეისწავლა ჩრდილოეთის ჰიბრიდიზაციით. (ბ) cdc18 A– ში ნაჩვენები mRNA დონეები დადგენილია BAS2000– ით (Fuji Film, ტოკიო, იაპონია). (გ)cdc2 + ტრანსკრიფცია არ მოქმედებსΔpas1 მუტანტიcdc2 + გამოხატვის შესწავლა მოხდა ჩრდილოეთ ჰიბრიდიზაციით იმავე ფილტრების გამოყენებით A. (D) Thecdc2 C– ში ნაჩვენები mRNA დონეები დადგენილია BAS2000– ით (Fuji Film).

Pas1 + გენი ხელს უწყობს უჯრედის ციკლის დაწყებას Res2p-Cdc10p გააქტიურებით

Pas1p– ის მოქმედების სამიზნე (ებ) ის დასადგენად, ჩვენ ჩავატარეთ გენეტიკური ანალიზის სერია. როგორც ზემოთ აღვნიშნეთ,Δpas1 უჯრედები იზრდება 30 ° C ტემპერატურაზე გამოვლენილი დეფექტის გარეშე. Δres 1 უჯრედები ასევე იზრდება ამ ტემპერატურაზე, თუმცა ცუდად (ტანაკა და სხვები 1992), Res2p-Cdc10p-Rep2p კომპლექსის არსებობის გამო (მიამოტო და სხვები, 1994 წ ნაკაშიმა და სხვები, 1995). თუმცა, უჯრედები ორმაგად წაიშალა res1 + დაpas1 + სინთეზურად სასიკვდილო იყო ამ ტემპერატურაზე. სპორების ტეტრადი დისექცია & gt200 ასკიდანΔres1/res1 + Δpas1/pas1 + დიპლოიდურ უჯრედებს არ მოჰქონდათ სიცოცხლისუნარიანი ჰაპლოიდური ორმაგი მუტანტური უჯრედები, რომლებიც აღმოცენდა, მაგრამ ძირითადად შეჩერდა ერთი გაყოფის შემდეგ, უჯრედების მკვეთრი გახანგრძლივებით (სურათი 4 ა). ორმაგი მუტანტების ლეტალობა არ იყო გამოწვეული გამოხატვის შემცირებითres2 + , cdc10 +, ან რეპ 2 + მასშიΔpas1 უჯრედები, რადგან mRNA დონეres2 + , cdc10 +, და რეპ 2 + გენი უცვლელი იყო მიუხედავად მისი არსებობისა თუ არყოფნისა pas1 + ეს შედეგი მიუთითებს იმაზე, რომ Pas1p არარსებობის შემთხვევაში Res2p-Cdc10p-Rep2p ტრანსკრიპციული ფაქტორების კომპლექსი არ არის საკმარისად დიდი, რომ შეინარჩუნოს Res1p მოკლებული უჯრედების ზრდა. Pas1p– სგან განსხვავებით, სხვა გ1 ციკლინებს არ ჰქონდათ გამოვლენილი გენეტიკური ურთიერთქმედება Res-Cdc10p-Rep– თან. პროლიფერაციული უნარის გამო, უჯრედები ორმაგად იშლებაres1 + დასიგარეტი 1 + , სიგარეტი 2 +, ან puc1 + განასხვავებელი იყო მათგანΔres 1 გარდა ამისა, ერთი მუტანტური უჯრედი, როდესაც ზედმეტად გამოხატულია, არცერთ ამ ციკლინს არ შეუძლია შეაჩეროს სიცივისადმი მგრძნობელობა Δres 1 უჯრედები.

ნახ. 4. გენეტიკური ურთიერთქმედებაpas1 + თან res1 + ,res2 +, და რეპ 2 + (ა) ტერმინალური ფენოტიპი Δres1 Δpas1 უჯრედები.Δres1/res1 + Δpas1/pas1 + დიპლოიდური უჯრედები ტეტრადი დაიშალა YEA ფირფიტებზე და ინკუბაცია 30 ° C ტემპერატურაზე. უჯრედები, რომლებიც აღმოცენდა Δres1 Δpas1 გადაღებულია ორმაგი წაშლის სპორები (სხვა სეგრეგანტების გენოტიპების მიხედვით). ბარი, 10 მმ. (ბ) წაშლა pas1 + მნიშვნელოვნად ამცირებს ზრდის ტემპს Δrep2 მუტანტი, მაგრამ არაΔres2 მუტანტი ველური ტიპი (L972), Δpas1(K193-A1), Δrep2 (K166-A5), Δpas1 Δrep2(K190-22B), Δres2 (K165-A12) და Δpas1 Δres2 (K189-3A) უჯრედები კულტივირებული იქნა MM (+N/2%G) 30 ° C ტემპერატურაზე და მათი ზრდა მონიტორინგდებოდა უჯრედების რიცხვის დათვლით. (გ) წაშლა pas1 + მნიშვნელოვნად აძლიერებს სიცივისადმი მგრძნობელობას Δrep2 მუტანტი უჯრედები დაინერგა MMA ფირფიტებზე და ინკუბაცია მითითებულ ტემპერატურაზე. (დ) წაშლაpas1 + აძლიერებს ნელ G- ს1პროგრესი Δrep2 მუტანტი, მაგრამ არა ისΔres2 მუტანტი უჯრედები გაიზარდა შუალედურ ფაზაში 30 ° C ტემპერატურაზე MM (+N/2%G) და გადაინაცვლეს 18 ° C- მდე. უჯრედების სინჯები მოხდა ტემპერატურის ცვლის შემდეგ 4 და 8 სთ -ში და გაანალიზებულია ნაკადის ციტომეტრიით. (E) წაშლა res2 + გენი მთლიანად თრგუნავს სიცივისადმი მგრძნობელობას Δpas1 Δrep2ორმაგი მუტანტი. ველური ტიპი (EV3A), Δres2 (M222),Δrep2 (N3-141S), Δpas1 (K182-A7),Δres2 Δrep2 (NP2-461), Δres2 Δpas1(K189-23C), Δrep2 Δpas1 (K190-5D) და Δres2 Δrep2 Δpas1 (K539-1A) უჯრედები დაინერგა YEA ფირფიტებზე და ინკუბაცია მითითებულ ტემპერატურაზე.

სიცივისადმი მგრძნობელობის ჩახშობაΔrep2 უჯრედების მიერpas1 + (სურათი 1B) მიუთითებს, რომ Pas1p ხელს უწყობს უჯრედის ციკლის დაწყებას Rep2 ტრანსკრიპციული აქტივატორის ქვედანაყოფის არარსებობის მიუხედავად. ეს დადასტურდა ორმაგ მუტანტებში ნაჩვენები სინთეტიკური ეფექტებით. Δrep2უჯრედები სიცივის მიმართ მგრძნობიარეა, მაგრამ იზრდება ისევე სწრაფად, როგორც ველური ტიპის უჯრედები 30 ° C ტემპერატურაზე. წაშლა pas1 + გენი, თუმცა, ამცირებს ზრდის ტემპს 30 ° C ტემპერატურაზე (სურათი 4B, მარცხენა გრაფიკი) და შესამჩნევად აძლიერებს სიცივისადმი მგრძნობელობას (სურათი 4, C და D). ᲮოლოΔrep2 ერთი მუტანტური უჯრედი იზრდება 18 ° C ტემპერატურაზე (ნაკაშიმა და სხვები, 1995), უჯრედები ორმაგად წაიშალა რეპ 2 + დაpas1 + ვერ გაიზარდა 23 ° C ტემპერატურაზეც კი (სურათი 4C). ყველა ეს შედეგი გულისხმობს იმას, რომ Pas1p ააქტიურებს 1) მხოლოდ Res2p-Cdc10p Rep2p– სგან დამოუკიდებლად ან 2) ორივე Res2p-Cdc10p და Res1p-Cdc10p.

ამ შესაძლებლობების გასარჩევად, მსგავსი ანალიზი ჩატარდაΔres2 უჯრედები, რომლებშიც აქტიურია მხოლოდ Res1p-Cdc10p კომპლექსები. Δres2 უჯრედები იზრდება ტემპერატურაზე რეგულარული კულტურისთვის, მაგრამ ნელა G- ში1პროგრესირება ან ნაწილობრივ შეჩერება 18 ° C ტემპერატურაზე (ჟუ და სხვები, 1994). წაშლა pas1 + არც შემცირდა ზრდის ტემპი (სურათი 4B, მარჯვენა გრაფიკი) და არც გაზარდა სიცივისადმი მგრძნობელობა (სურათი 4E) Δres2 უჯრედები. ამის დადასტურება, როდესაც გადაინაცვლებს 30 -დან 18 ° C- მდე,Δres2 მარტოხელა და Δres2 Δpas1 ორმაგი მუტანტური უჯრედები დააპატიმრეს გ1 იგივე სიჩქარითა და მოცულობით, როგორც ეს ნაჩვენებია დინების ციტომეტრიული ნიმუშებით ფიგურაში 4D. ამრიგად, Pas1p– სა და Res1p-Cdc10p– ს შორის არ იყო გამოვლენილი ფუნქციური ურთიერთქმედება. ერთად, ამ შედეგებმა მიგვიყვანა იმ დასკვნამდე, რომ Pas1p ხელს უწყობს უჯრედის ციკლის დაწყებას Res2p-Cdc10p კომპლექსის სპეციალურად გააქტიურების გზით Rep2– ის გარეშე.ტრანს-აქტივატორის ქვედანაყოფი. სიცივისადმი მგრძნობელობის სრული ჩახშობა Δpas1 Δrep2 უჯრედები წაშლითres2 + (სურათი 4E) სრულად შეესაბამება ამ დასკვნას.

Rep2p- დამოუკიდებელი გააქტიურება Res2p-Cdc10p Pas1p– ით არ ნიშნავს იმას, რომ Pas1p პირდაპირ ააქტიურებს Res2p-Cdc10p ყოველგვარიტრანს-აქტივატორის ქვედანაყოფი. ს. პომბე შეიცავს Rep1p– ს, როგორც Rep2p– ს მეიოტურ კოლეგას, რომელიც ძლიერ გამოწვეულია კონიუგაციის დროს, მაგრამ მაინც ოდნავ გამოხატულია აზოტით შიმშილის პირობებში შეწყვილების პარტნიორების გარეშე (სუგიიამა და სხვები, 1994). ამრიგად, არსებობს შესაძლებლობა, რომ ოდნავ გამოხატული Rep1p შეიძლება ჩაერთოს Rep2p დამოუკიდებელ Res2p-Cdc10p აქტივაციაში Pas1p– ის მიერ. ამ შესაძლებლობის შესამოწმებლად, ჩვენ შევადარეთ უნარიpas1 + გადარჩენაΔrep2 უჯრედები დაბალ ტემპერატურაზე ყოფნა და არარსებობა rep1 + გენი. თუ Pas1p მოითხოვს Rep1p გადარჩენისთვის Δrep2 უჯრედები, უჯრედები ორმაგად წაშლილია რეპ 2 + დაrep1 + არ იქნება გადარჩენილიpas1 + შედეგი აჩვენებს, რომ Pas1p გადაარჩინაΔrep1 Δrep2 უჯრედები (NPP-12D) ეფექტურობით 15.0%, რაც შედარებადია 17.8% ეფექტურობასთან Δrep2 უჯრედები (N3-141S) (ეფექტურობის აღსაკვეთად იხილეთ მასალები და მეთოდები). ეს შედეგები მტკიცედ მიგვითითებს იმაზე, რომ Pas1p ააქტიურებს Res2p-Cdc10p ცნობილისგან დამოუკიდებლად ტრანს-აქტივატორული ქვედანაყოფები ამ MCB- სავალდებულო კომპლექსისთვის.

უჯრედებს აკლია pas1 + დახელოვნებულია უღლებაში

ჩვენ ადრე აღმოვაჩინეთ, რომ Cig2 ციკლინი უარყოფითად არეგულირებს კონიუგაციას უჯრედული ციკლის დაწყების როლის გარდა (კონოლი და ბიჩი, 1994 ობარა-იშიჰარა და ოკაიამა, 1994). იმის შესასწავლად, რომ Pas1p– ს შეიძლება ჰქონდეს მსგავსი ფუნქცია, ჩვენ გამოვიკვლიეთ ჰომოტალურის შეჯვარების ეფექტურობა Δpas1 უჯრედები სხვადასხვა კულტურის პირობებში. ორივე ველური ტიპის დაΔpas1 უჯრედები არ შეუერთდნენ ზრდის საშუალო შემცველ 2% გლუკოზას და 0.5% ამონიუმის ქლორიდს, როგორც ნახშირბადის და აზოტის ერთადერთ წყაროს სტაციონარულ ფაზაშიც კი. თუმცა, როდესაც გლუკოზის კონცენტრაცია 0.5%-მდე შემცირდა, ველური ტიპის უჯრედებისგან განსხვავებით,Δpas1 უჯრედები კონიუგირებულია და ახორციელებენ მეიოზს 15% ეფექტურობით (სურათი 5A). აზოტის შიმშილი არ არის საკმარისი იმისათვის, რომ გამოიწვიოს ველური ტიპის ეფექტური კონიუგაცია ს. პომბე უჯრედები, რადგან სქესობრივი დიფერენციაციის დაწყება ნაწილობრივ შეფერხებულია მაღალი გლუკოზის პირობებში. თუმცა, ველური ტიპის უჯრედებისგან განსხვავებით, Δpas1 უჯრედები ძალიან ეფექტურად კონიუგირებულია აზოტით თავისუფალი გლუკოზით მდიდარ გარემოში (სურათი 5B). ამრიგად, უჯრედები აკლია pas1 + შესამჩნევად გაძლიერდა კონიუგაციისადმი ერთგულებით.

ნახ. 5. Pas1 ციკლინი უარყოფითად არეგულირებს სექსუალურ დიფერენციაციას. (ა) ჰომოტალური ველური ტიპის (L968) (ღია სიმბოლოების) შეჯვარების ეფექტურობა და Δpas1 მუტანტური (K207-A1) (დახურული სიმბოლოები) უჯრედები აზოტით მდიდარ MM- ში. უჯრედები გაიზარდა შესვლის ფაზაში MM (+N/2%G) და გადავიდა MM (+N/2%G) (წრეებში) ან MM (+N/0.5%G) (კვადრატებში) და განისაზღვრა შეჯვარების სიხშირეები რა (ბ) ჰომოტალური ველური ტიპის (ღია სიმბოლოების) შეჯვარების ეფექტურობა და Δpas1 მუტანტური (დახურული სიმბოლოები) უჯრედები MM აზოტის გარეშე. უჯრედები გაიზარდა შესვლის ფაზაში MM (+N/2%G) და გადავიდა MM (−N/2%G) (წრეებში) ან MM (−N/0.5%G) (კვადრატებში) და განისაზღვრა შეჯვარების სიხშირეები რა (გ)sxa2 + ტრანსკრიფცია გამოწვეულია აზოტის შიმშილის გარეშე Δpas1 უჯრედები P ფაქტორით. -ველური ტიპის (L972) დაΔpas1 (K193-A1) უჯრედები დაინერგა MM (+N/0.5%G) და გაშენდა 2 მკგ/მლ P- ფაქტორის (+) ან არყოფნის (-) თანდასწრებით. უჯრედები იკრიფებოდა მითითებულ დროს და sxa2 + გამოხატულება შეისწავლა ჩრდილოეთის ჰიბრიდიზაციით. (დ) Δpas1 უჯრედები ჰიპერმგრძნობიარეა ფერომონის შეჯვარების მიმართ და აჩერებენ უჯრედის ციკლს საკვები ნივთიერებების შიმშილის გარეშე. Δsxa2 (K205-A1) (მოხსენიებულია როგორც ველური ტიპის ღია სიმბოლოები) და Δsxa2 Δpas1 (K209-22A) (მოხსენიებულია როგორც Δpas1 დახურული სიმბოლოები) უჯრედები ინოქცირებული იქნა MM (+ N/0.1%G), იყოფა ორ ნაწილად, ინკუბაცია 30 ° C ტემპერატურაზე 4.5 სთ, შემდეგ კულტივირებული ყოფნა (+ წრეები) ან არარსებობა ( - კვადრატები) 2 მკგ/ მლ P ფაქტორი. უჯრედების ზრდა მონიტორინგდებოდა უჯრედების რიცხვის დათვლით. (ე) Δpas1 უჯრედები იჭრება გ1 ფაზა P- ფაქტორზე ზემოქმედებისას. D- ში გამოყენებული იგივე უჯრედული კულტურები P- ფაქტორის დამატების შემდეგ 4 სთ-ში მიიღეს და გაანალიზდნენ ნაკადის ციტომეტრიით. (F) Δrep2 უჯრედები თანაბრად ეფექტურია, როგორც Δpas1 უჯრედები. ჰომოტალური ველური ტიპი (L968),Δpas1 (K207-A1), Δrep2 (K166-A1) დაΔnrd1 (14-1) უჯრედები გაიზარდა შესვლის ფაზაში MM (+N/2%G), გადავიდა MM (+N/0.5%G) ან MM (−N/2%G) და გაშენდა 30 ° C ტემპერატურაზე რა შეჯვარების ეფექტურობა განისაზღვრა შეჯვარებული უჯრედების გამოკვლევით ინკუბაციის 24 საათის შემდეგ. (G) წაშლაpas1 + არ არის ეპისტატიკური მისი წაშლაnrd1 + ჰომოტალური ველური ტიპი (L968),Δpas1 (K207-A1), Δnrd1 (14-1) დაΔnrd1 Δpas1 (K228-29A) უჯრედები გაიზარდა შესვლის ფაზაში MM (+N/2%G) და გადავიდა MM (+N/0.5%G). შეჯვარების სიხშირე განისაზღვრა როგორც ზემოთ აღწერილი.

უჯრედები აკლია სიგარეტი 2 + არიან ჰიპერმძიმეები ნაწილობრივ იმიტომ, რომ მათ ხელი შეუწყოთ დაპატიმრება გ1აზოტით შიმშილის პირობებში (ობარა-იშიჰარა და ოკაიამა, 1994). Კონტრასტში, Δpas1 უჯრედებმა არ აჩვენეს აღმოსაჩენი გამარტივება გ1 აზოტის ან ნახშირბადის შიმშილის საპასუხოდ დაკავება. ამრიგად, ჩვენ გამოვიკვლიეთ მუტანტის მგრძნობელობა შეჯვარების ფერომონების მიმართ, რადგან შეწყვილების ფერომონით შუამავლობით უჯრედ -უჯრედი კომუნიკაცია აუცილებელია კონიუგაციის გამოსაყენებლად (განსახილველად იხ. ნილსენი და დეივი, 1995). P- ფაქტორი, სეკრეციის გამომყოფი ფერომონი + უჯრედები, დეგრადირებულია სერინის კარბოქსიპეპტიდაზას მიერ კოდირებულიsxa2 + გენი (Imai and Yamamoto, 1992). საინტერესოა, sxa2 + გააქტიურებულია P- ფაქტორზე ზემოქმედებისას P- ფაქტორის სიგნალის საშუალებით P- ფაქტორის რაოდენობის დასაქვეითებლად, უარყოფითი უკუკავშირის მარყუჟის ფორმირებისას. თუმცა, P- ფაქტორის არსებობა არ არის საკმარისი sxa2 + ინდუქცია და თანმხლები კვების შიმშილი ასევე საჭიროა, რადგან P- ფაქტორის სასიგნალო სისტემა ეფექტური ხდება მხოლოდ მაშინ, როდესაც საკვები ნივთიერებები ამოწურულია. შესაბამისად, ველური ტიპის -უჯრედები კულტივირებული აზოტით მდიდარ გარემოში, რომელიც შეიცავს 0,5% გლუკოზას და 2 μg/ml P ფაქტორს, არაsxa2 დაფიქსირდა + mRNA ინდუქცია (სურათი 5C). ამის საპირისპიროდ, Δpas1 უჯრედები გაშენებულია იმავე გარემოში,sxa2 + mRNA გამოწვეული იყო 2 სთ-ზე დროებით, რაც აჩვენებს, რომ ამ უჯრედებში ფერომონის სიგნალის გზა ადვილად გააქტიურებულია P- ფაქტორით, მკვებავი შიმშილის გარეშე.

ფერომონების შეჯვარება იწვევს G- ს1 პარტნიორი უჯრედების დაპატიმრება (დეივი და ნილსენი, 1994 Imai და Yamamoto, 1994) ნაწილობრივ მაინც Cdc2p-Cdc13p/Cig2p (Stern and Nurse, 1997) ინჰიბირებით, შეწყვილების ფერომონის სიგნალის გზის გააქტიურების გზით. ამრიგად, იმის გათვალისწინებით, რომ Pas1p– ის არარსებობა ითხოვს საკვები ნივთიერებების შიმშილის მოთხოვნას P– ფაქტორით გამოწვეული შეჯვარების ფერომონის სიგნალის გზის გააქტიურებაში, იწინასწარმეტყველა, რომ P– ფაქტორმა შეიძლება გამოიწვიოს G1 Pas1p– ს მოკლებული უჯრედების დაპატიმრება საკვები შიმშილის გარეშე. ამ პროგნოზის შესამოწმებლად, ორივე -ველური ტიპის უჯრედები დაΔpas1უჯრედები კულტივირებული იქნა P- ფაქტორის შემცველ ზრდის გარემოში და შედარებული იყო მათი ზრდის მაჩვენებლები. ამ ექსპერიმენტში აზოტით მდიდარი, მაგრამ დაბალი გლუკოზა (0.1%) საშუალო და შტამებიΔsxa2 ფონი გამოყენებული იყო P- ფაქტორის ეფექტურობის გასაძლიერებლად. P- ფაქტორის დამატებამ არ გამოიწვია არც ზრდის შეფერხება (სურათი 5D) და არც მორფოლოგიური ცვლილებები სწრაფად მზარდი ველური ტიპის უჯრედებში, თუმცა მათი პროგრესირება G1 ფაზა გადაიდო, რაც მითითებულია G– ის გამოჩენით1 პიკი დინების ციტომეტრიაში (სურათი 5E). მეორეს მხრივ, P- ფაქტორის ზემოქმედებისას,Δpas1 უჯრედები დროებით დაკავებულია შუა ფაზაშიც კი. ზრდის ინჰიბირება აშკარა გახდა P- ფაქტორის დამატებიდან 4 საათის შემდეგ და გაგრძელდა ∼ 4 სთ (სურათი 5D). ზრდის შეჩერების დროს, უჯრედებმა გააგრძელა კონიუგაციის მილები და გაზარდა მათი მოცულობა. ნაკადის ციტომეტრიამ გამოავლინა, რომ უჯრედების უმეტესობა P- ფაქტორის დამატებიდან 4 საათის შემდეგ იყო G- ში1 (სურათი 5E). ამ ზრდის გარდამავალი შეჩერების შემდეგ, უჯრედებმა დაიწყეს გამრავლება. ეს შედეგები მიუთითებს იმაზე, რომ Pas1p თამაშობს როლს შეჯვარების ფერომონის სასიგნალო გზის საკვები ნივთიერებებით რეპრესიაში, გარდა Res2p-Cdc10p გააქტიურების.

Pas1 ციკლინის მიერ შეჯვარების ფერომონის სასიგნალო გზის საკვები ნივთიერებებით კონტროლირებადი რეპრესია შეიძლება იყოს Res2p-Cdc10p- ის გააქტიურების არაპირდაპირი ეფექტი, რადგანres1 + აფერხებს კონიუგაციას (ტანაკა და სხვები, 1992) და უჯრედებს, რომლებსაც არ გააჩნიათ res1 + გენის გაძლიერებული შეჯვარება (Caliguiri and Beach, 1993 K.T. გამოუქვეყნებელი დაკვირვება). ამ შესაძლებლობის შესამოწმებლად, ჩვენ შევადარეთ შეჯვარების ეფექტურობა Δpas1 დაΔrep2 უჯრედები. თუ Pas1p- ის გავლენა შეჯვარების სიგნალის ჩახშობაზე არის Res2p-Cdc10p- ის გააქტიურების არაპირდაპირი ეფექტი, შეჯვარების ეფექტურობა Δrep2უჯრედები გაცილებით მაღალი იქნებოდა ვიდრე Δpas1უჯრედები, რადგან განსხვავებით Δpas1 უჯრედები,Δrep2 უჯრედები გადიან G1ძალიან ნელა MCB– ის არასაკმარისი გააქტიურების შედეგად და შესაბამისად დიდად შეუწყალდა ხელი G– ს დაპატიმრებას1(ნაკაშიმა და სხვები, 1995). როგორც ნაჩვენებია სურათი 5F,Δrep2 უჯრედები მსგავსი იყოΔpas1 უჯრედებს აქვთ უნარი შეუერთდნენ საკვები ნივთიერებებით მდიდარ გარემოს. ეს შედეგი მტკიცედ მიანიშნებს, რომ Pas1 ციკლინი აკონტროლებს შეწყვილების ფერომონის სიგნალს Res2p-Cdc10p გააქტიურებისგან დამოუკიდებლად.

Nrd1p არის რნმ-ის შემცველი ცილა, რომელიც ბლოკავს კონიუგაციის ვალდებულებას მანამ, სანამ უჯრედები არ მიაღწევენ საკვებ ნივთიერებების შიმშილის კრიტიკულ დონეს (ცუკაჰარა და სხვები, 1998). უჯრედები, რომლებსაც არ გააჩნიათ Nrd1p, ჰგავს მათ, ვისაც Pas1p არ გააჩნია შიმშილის გარეშე კონიუგირების უნარი (სურათი 5, F და G). ფენოტიპურმა მსგავსებამ მოგვიტანა ორი გენის ეპისტატიკური ანალიზის ჩატარება. ორივე უჯრედი წაშლილიაpas1 + და nrd1 + წარმოიქმნა გადაკვეთის გზით და შეადარეს თითოეულ ცალკეულ ხელის შემშლელს შეჯვარების უნარის გამო. როგორც ნაჩვენებია დიაგრამა 5G- ში, ორმაგ გამანადგურებელს ჰქონდა უფრო დიდი კონიუგაციის ეფექტურობა MM- ში (+N/0.5%G) ვიდრე თითოეულ ცალკეულ გამანადგურებელს, რაც იმაზე მეტყველებს, რომ Pas1p აკონტროლებს ფერომონის სიგნალიზაციას Nrd1p– სგან დამოუკიდებლად.

Pas1p არ არის ჩართული ფოსფატის მეტაბოლიზმში

ის PHO80 გენი S. cerevisiae გამოვლინდა, როგორც ნეგატიური მარეგულირებელი PHO5 მჟავა ფოსფატაზის გენი (ოშიმა, 1982). იმ pho80 მუტანტი,PHO5 გენი არის კონსტიტუციურად გამოხატული თუნდაც ფოსფატებით მდიდარ გარემოში. მსგავსი რეგულაცია ასევე ხდება დაშლის საფუარში და მჟავა ფოსფატაზას მოქმედება გამოწვეულია ფოსფატის შიმშილით (Mitchison and Creanor, 1969 Dibenedetto, 1972). Pho80p– სთან ერთად ამინომჟავის ჰომოლოგიის გამო, არ იყო უსაფუძვლო ეჭვი, რომ Pas1p შეიძლება ასევე მონაწილეობდეს ფოსფატის მეტაბოლიზმში. ამიტომ, ჩვენ გამოვიკვლიეთ მისი ყოფნის ან არყოფნის ეფექტიpas1 + მჟავა ფოსფატაზის აქტივობაზე, რომელიც პასუხობდა ფოსფატის ხელმისაწვდომობას. მაღალი ან დაბალი ფოსფატის საშუალო ზრდის შემდეგ, მჟავა ფოსფატაზას აქტივობა იქნა ჩახშობილი ან გამოწვეული ანალოგიურად ველური ტიპის დაΔpas1 უჯრედები (ველური ტიპის, 7.6-ჯერ ინდუქციურიΔpas1, 8.4-ჯერ ინდუქცია), რაც აჩვენებს, რომ Pas1p ნაკლებად სავარაუდოა მონაწილეობა მიიღოს ფოსფატის მეტაბოლიზმის რეგულირებაში. ამრიგად, სტრუქტურული მსგავსების მიუხედავად, მის ბიოლოგიურ როლში Pas1 ციკლინი მნიშვნელოვნად განსხვავდება საფუარის საფუარის Pho80p– სგან.

Pas1 Cyclin Associates In Vivo Cdc2 და Pef1 Kinases– თან ერთად

ში S. cerevisiae, Pcl ციკლინები ასოცირდება Pho85 კინაზასთან, მაგრამ არა Cdc28 კინაზასთან, Cdc2p საფუარის საფუარის ანალოგი (ესპინოზა და სხვები, 1994 დღის დღე და სხვები, 1994). ასოცირებული ცილა კინაზას (ებ) ის და კინაზას აქტივობების დასადგენად, ჩვენ გამოვხატეთ FLAG- ით მონიშნული Pas1p ს. პომბეუჯრედები. FLAG მონიშნული Cdc13 მიტოზური B ტიპის ციკლინი გამოიყენებოდა როგორც დადებითი კონტროლი Cdc2 კინაზასთან ასოცირებისათვის. საჭიროების შემთხვევაში, უჯრედები დააპატიმრეს ადრეულ S ფაზაში, 4 საათის განმავლობაში კულტივირებაში, 12 მლნ ჰიდროქსილის შარდოვანას შემცველობით, უჯრედის მოპოვებამდე. Res-Cdc10p-Rep სრულად აქტიურია დაკავების ამ ადგილას (ბაუმ და სხვები, 1997). უჯრედის ლიზატები ინკუბირებული იქნა საწინააღმდეგო FLAG ანტისხეულით ან p13 suc1 მძივებით, ხოლო ნალექები გამოყოფილია SDS-PAGE– ით, რასაც მოჰყვა იმუნობლოტაცია ანტი – FLAG ან anti – PSTAIR ანტისხეულებით ან განისაზღვრა ჰისტონ H1 კინაზას აქტივობისთვის. გელში, FLAG-Cdc13p კომიგრირებული იყო IgG– ით. როგორც ნაჩვენებია ფიგურაში 6A, Pas1p იყო კოპრეციპიტირებული 34-kDa პროტეინით, რომელიც გამოვლენილია ანტი-PSTAIR ანტისხეულებით. ეს PSTAIR ცილა განურჩეველი იყო Cdc2 კინაზასგან, რომელიც დაკავშირებულია Cdc13p– თან, თუმცა რაოდენობა მცირე იყო. Pas1p– თან დაკავშირებული PSTAIR ცილის რაოდენობა და მობილურობა არ შეცვლილა ადრეულ S– ფაზის უჯრედებსა და ექსპონენციალურად მზარდ უჯრედებს შორის. ეს კომპლექსი, თუმცა, ფოსფორილირებულ ჰისტონს H1 ძალიან ცუდად თუ შეედრება Cdc2p-Cdc13p კომპლექსს (სურათი 6A). მიელინის ძირითადი ცილა და კაზეინი ასევე ცუდად იყო ფოსფორილირებული Pas1p– სთან დაკავშირებული კინაზით.

ნახ. 6. Pas1 ციკლინი in vivo ასოცირდება როგორც Cdc2, ასევე Pef1 კინაზასთან. (A) Cdc2 კინაზას მსგავსი ცილა კოპრეციპიტაციას ახდენს Pas1 ციკლინთან ერთად. ლიზატი მზადდებოდა Δpas1 უჯრედები (K182-A7), რომლებიც გამოხატავს pREP1-FLAGpas1 (შესახვევები 1 და 2), pREP1-X (შესახვევები 3 და 4), ან pREP1-FLAGcdc13 (შესახვევები 5 და 6). უჯრედები გაშენებულია MM- ში (+N/2%G) არარსებობისას (ბილიკები 1, 3 და 5) ან ყოფნა (შესახვევები 2, 4 და 6) 12 მმ ჰიდროქსილის შარდოვანას. ლიზატებს ჩაუტარდათ იმუნოპრეციპიტაცია ანტი-FLAG M2 ანტისხეულით. იმუნოპრეციპიტატები იმუნობლოკდნენ ანტი-FLAG M2 (ზედა პანელი) ან anti-PSTAIR (შუა პანელი) ანტისხეულებით, შესაბამისად, ან განისაზღვრა ჰისტონ H1 კინაზას აქტივობისთვის (ქვედა პანელი). FLAG-Cdc13 ცილა შერეულია IgG– ით (ზედა პანელის შესახვევები 5 და 6). (ბ) Pas1 ციკლინთან დაკავშირებული კინაზა არ აკავშირებს Suc1p- ს. A– ში გამოყენებული იგივე ლიზატები ინკუბირებულია p13 suc1 მძივებით Cdc2 კინაზას კომპლექსის ჩამოსაყვანად. ნალექები იმუნობლოკილი იქნა ანტი-FLAG M2 (ზედა პანელი) ან ანტი- PSTAIR (ქვედა პანელი) ანტისხეულით. (C) Cdc2p და Pef1p მოლეკულების იდენტიფიკაცია. ლიზატები მომზადებულია ველური ტიპის (EV3A )გან, Δpef1 (K571-2D),cdc2HA + (K230-A6) დაpef1HA + (K566-11) უჯრედები. მთელი უჯრედის ლიზატები გამოყოფილია SDS-PAGE- ით და იმუნობლოკდება ანტი-PSTAIR (მარცხენა პანელი) ან ანტი-HA (მარჯვენა პანელი) ანტისხეულებით. (D და E) Pas1 ციკლინი in vivo ასოცირდება Cdc2 და Pef1 კინაზებთან. (დ) ლიზატები მომზადდა cdc2HA + უჯრედები (K230-A6), რომლებიც გამოხატავს pREP1-FLAGpas1 (შესახვევები 1 და 4), pREP1-X (შესახვევები 2 და 5), ან pREP1-FLAGcdc13 (შესახვევები 3 და 6). ლიზატები იმუნოპრეციპიტირებული იქნა ანტი-FLAG M2 ანტისხეულით. მთელი უჯრედის ლიზატი (მარცხენა პანელის შესახვევები 1–3) და იმუნოპრეციპიტატები (მარჯვენა პანელის ზოლები 4-6) იმუნობლოტირებული იქნა საწინააღმდეგო FLAG D-8 (ზედა პანელები), anti-HA (მეორე პანელები), ან საწინააღმდეგო PSTAIR ( მესამე და ქვედა პანელები) ანტისხეულები. ამ ექსპერიმენტში გამოყენებულია კურდღლის საწინააღმდეგო FLAG D-8 ანტისხეული, რათა თავიდან ავიცილოთ არასასურველი რეაქცია თაგვის IgG– სთან (ზედა პანელები). (ე) ლიზატები მზადდებოდა pef1HA + უჯრედები (K566-11), რომლებიც გამოხატავს pREP1-FLAGpas1 (შესახვევები 1 და 4), pREP1-X (შესახვევები 2 და 5), ან pREP1-FLAGcdc13 (შესახვევები 3 და 6). ლიზატები იმუნოპრეციპიტირებული იქნა ანტი-FLAG M2 ანტისხეულით. მთელი უჯრედის ლიზატი (მარცხენა პანელის შესახვევები 1–3) და იმუნოპრეციპიტატები (მარჯვენა პანელის ჩიხები 4-6) იმუნობლოტირებული იქნა საწინააღმდეგო FLAG D-8 (ზედა პანელები), anti-HA (შუა პანელები), ან საწინააღმდეგო PSTAIR ( ქვედა პანელები) ანტისხეულები. FLAG- იანი ცილებით გამოვლენილია ანტი FLAG D-8 კურდღლის პოლიკლონური ანტისხეული, რათა თავიდან ავიცილოთ არასასურველი რეაქცია თაგვის IgG– სთან (ზედა პანელი).

Suc1p აკავშირებს Cdc2p- ს, რომელიც დაკავშირებულია გარკვეულ ციკლინებთან, მათ შორის Cdc13p და Cig1p (Booher და სხვები, 1989 ბასი და დრაეტა, 1995).შესაბამისად, Suc1p სავალდებულო იძლევა მოსახერხებელ ანალიზს კინაზას კომპლექსის დასახასიათებლად. პროტეინები, რომლებიც აკავშირებენ p13 suc1 მძივებს, გაანალიზებულია იმუნობლოტაციით ანტი-FLAG და anti-PSTAIR ანტისხეულებით. Cdc13p– სთან ასოცირებული Cdc2p– სგან განსხვავებით, Pas1p– სთან ასოცირებული კინაზა არ არის შეკრული Suc1p– ზე, რაც მითითებულია FL13 – Pas1p– ის არარსებობით p13 Suc1 შეკრული ცილებში (სურათი 6 ბ).

მოციმციმე საფუარში, Pcl cyclins ასოცირდება Pho85 კინაზასთან, მაგრამ არა Cdc28 კინაზასთან. ის ს. პომბე გენომის თანმიმდევრობის პროექტმა ახლახანს გამოავლინა ORF (SPCC16C4.11), რომელსაც შეუძლია დაშიფროს ცილა Pho85 კინაზას უაღრესად ჰომოლოგიური S. cerevisiaeდა PhoA კინაზა Emericella nidulans (სურათი 7). ჩვენ დავარქვით ამ სავარაუდო გენსpef1 + (პომბე pho ოთხმოცდახუთი), რადგან როგორც ქვემოთ მოცემულია ამ გენის მიერ კოდირებული Pef1 კინაზა არის Pas1 ციკლინის ფუნქციური ასოციაციის პარტნიორი. ორივე Cdc2p და Pef1p აქვს კონსერვატიული PSTAIR მოტივი და მათი გამოთვლილი მოლეკულური წონა მსგავსია (34,358 Cdc2p და 32,736 Pef1p). ამის გამო, ძნელი იყო Pas1– თან ასოცირებული PSTAIR კინაზ (ების) იდენტიფიცირება გენური მანიპულირების გარეშე. ამიტომ, ჩვენ ავაშენეთ აΔpef1 მუტანტი (იხილეთ ქვემოთ კონსტრუქციისთვის) და ორი ეპიტოპით მონიშნული შტამი, რომელსაც მოიხსენიებენcdc2HA + დაpef1HA + იმcdc2HA + დაძაბულობა, ქრომოსომულიcdc2 + შეიცვალა acdc2 + გენი, რომელსაც გააჩნია გრიპის ვირუსის HA ცილის ეპიტოპეს სამი ასლი C ტერმინალში. ანალოგიურად, ქრომოსომული pef1 + შეიცვალა apef1 + გენი, რომელსაც აქვს HA პროტეინის სამი ასლი pef1HA + დაძაბულობა. ამ შტამების გამოყენებით, Cdc2p და Pef1p შეიძლება გამოვლინდეს იმუნობლოტაციით ანტი-PSTAIR და ანტი-HA ანტისხეულებით (სურათი 6C). ველური ტიპის უჯრედების ექსტრაქტების საწინააღმდეგო იმუნობლოტირებისას გამოვლინდა ორი ზოლი, მკვრივი 34-kDa ზოლი და სუსტი 33-kDa ზოლი, რომელთაგან ეს უკანასკნელი არ არსებობდაΔpef1 უჯრედები. გარდა ამისა, ორიგინალური 34-კდ-იანი ზოლი გადავიდა 38 კდადაზე (ზომის ზრდა გამოწვეულია HA ტეგით)cdc2HA + დაძაბულობა და ორიგინალური 33-kDa ზოლი გადავიდა 37 kDa– ში pef1HA + შტამი, თანმხლები შეღებვით ანტი-HA ანტისხეულთან. მოულოდნელად, HA მარკირებამ მნიშვნელოვნად გაზარდა 33-kDa ცილის რაოდენობა, ალბათ ცილის სტაბილიზაციის შედეგად, თუმცა მისი მექანიზმი უცნობი იყო. მიუხედავად ამისა, ამ შედეგებმა გვაიძულა მიგვეცა 34-kDa ზოლი Cdc2p– ზე და 33 – kDa ზოლი Pef1p– ს. ამ ინფორმაციის გათვალისწინებით, ჩვენ დეტალურად გამოვიკვლიეთ Pas1p– თან დაკავშირებული PSTAIR ცილა (ები). ჩვენ გამოვიყენეთ ეპიტოპით მონიშნული შტამები, როგორც ზემოთ აღწერილი იგივე ანალიზისთვის, რადგან ორიგინალური Cdc2p და Pef1p ძალიან მჭიდროდ მიგრირდნენ SDS-polyacrylamide გელებში (სურათი 6C, ველური ტიპის შესახვევი). ექსპერიმენტში cdc2HA + შტამი, ძირითადი Pas1p ასოცირებული PSTAIR ცილა არა მხოლოდ ანტი-HA ანტისხეულების მიერ იქნა აღიარებული, არამედ გადავიდა 38 kDa– ზე (სურათი 6D, ჩიხი 4), რაც ადასტურებს, რომ Pas1p– სთან დაკავშირებული ცილა არის Cdc2p. გარდა ამისა, PSTAIR ცილის მცირე რაოდენობა, რომელიც შეესაბამება Pef1 კინაზას ზომას, ასევე კოპრეციპიტირებულია Pas1p– ით, მაგრამ არა Cdc13p– ით (სურათი 6D, ქვედა პანელები). ამ უმნიშვნელო PSTAIR ცილის Pef1p დასადასტურებლად, ჩვენ იგივე ანალიზი ჩავატარეთ pef1HA + დაძაბულობა (სურათი 6E). ამ ანალიზში, უმნიშვნელო PSTAIR ცილა გადავიდა Cdc2p– ზე ზემოთ ანტი-HA ანტისხეულთან ერთად შეღებვით (სურათი 6E, ჩიხი 4), რაც ადასტურებს მას Pef1p. როგორც ჩანს, Pef1p ქმნიდა კომპლექსს Pas1p– ით უფრო მაღალი მიახლოებით, ვიდრე Cdc13p– სთან. Cdc13p-coprecipatated Pef1p- ის ოდენობა მსგავსი იყო Pas1p-coprecipitated Pef1p- ს მიუხედავად იმისა, რომ Cdc13p იყო 5-დან 10-ჯერ უფრო უხვად ვიდრე Pas1p ამ უჯრედებში. მეორეს მხრივ, Cdc2p, როგორც ჩანს, ქმნიდა კომპლექსს Pas1p და Cdc13p მსგავსი მსგავსებით, რადგან უჯრედების ექსტრაქტებში შემავალი Pas1p და Cdc13p რაოდენობით ნორმალიზებულია Pas1p- ით შეკრული Cdc2p და Cdc13p შეკრული Cdc2p რაოდენობა. მსგავსი (სურათი 6E).

ნახ. 7. Pef1 ცილის სტრუქტურა. (ა) შეზღუდვის რუკა pef1 + გენი. თეთრი ისარი მიუთითებს მის მიმართულებას და მოცულობასpef1 + ORF. სტრუქტურაPSTᲛᲔ-სპემე ფრაგმენტი გამოიყენება დარღვევისათვის pef1 ასევე ნაჩვენებია + გენი. (ბ) ამინომჟავის ჰომოლოგია შორის ს. პომბე Pef1p (Pef1 Sp),ე.ნიდულანსი PhoAp (M47) (PhoA En) (ბუსინკი და ოსმანი, 1998), S. cerevisiae Pho85p (Pho85 Sc) (უესონო და სხვები, 1987) და ს. პომბე Cdc2p (Cdc2 Sp) (Hindley and Phear, 1984). ამინომჟავები, რომლებშიც Pef1p დანარჩენი სამი კინაზის იდენტურია, ნაჩვენებია შავად. ###### მიუთითებს კონსერვატიულ PSTAIR მოტივზე.

Pef1 Kinase საჭიროა Res-Cdc10p-Rep გააქტიურებისათვის

იმის დასადგენად, თუ რომელი Pef1p ან Cdc2p არის Pas1 cyclin– ის ფუნქციური პარტნიორი Res2p-Cdc10p გასააქტიურებლად, ჩვენ გავაანალიზეთ თვისებებიΔpef1 უჯრედები. ისpef1 + გენი იზოლირებული იქნა კოლონიის ჰიბრიდიზაციით და უჯრედები აკლია pef1 + აშენდა ერთსაფეხურიანი გენის ჩანაცვლებითura4 + გენი (სურათი 7A). ჰაპლოიდიΔpef1 უჯრედები, რომლებიც აღმოცენდნენ გენის დარღვეული დიპლოიდური უჯრედების სპორებიდან, სიცოცხლისუნარიანი იყო და გავრცელდა ყველა ტემპერატურაზე 18-დან 36 ° C- მდე, თუმცა მათი გავრცელება უფრო ნელი იყო, ვიდრე ველური ტიპის უჯრედებზე. თუმცა, ისევე როგორცΔpas1 Δres1 უჯრედები,Δpef1 Δres1 უჯრედები სინთეზურად სასიკვდილო იყო. კვეთის შედეგად წარმოქმნილი & gt100 ასკის ტეტრადი დისექცია Δpef1 უჯრედებთან ერთადΔres 1 უჯრედებმა გამოიწვია სიცოცხლისუნარიანი ორმაგი მუტანტის წარმოება, მუტანტები აღმოცენდნენ, მაგრამ უმეტესად დაკავდნენ, როგორც წაგრძელებული უჯრედები. უფრო მეტიც, Δpef1 მუტანტი ასევე სინთეზურად მომაკვდინებელი აღმოჩნდა Δrep2მუტაცია ამის საპირისპიროდ, როგორც მოსალოდნელი იყო, Δpef1 Δres2 უჯრედები სიცოცხლისუნარიანი იყო. ამრიგად, ამ გენეტიკურ ურთიერთქმედებაში, pef1 + იქცეოდა ძალიან ანალოგიურად pas1 +, რაც მიუთითებს იმაზე, რომ Pef1 კინაზა არის Pas1 ციკლინის ფუნქციური ასოციაციის პარტნიორი, რომელიც ააქტიურებს Res2p-Cdc10p. -ის დეტალური დახასიათებაpef1 + გენი სხვაგან იქნება აღწერილი.

Pas1 Cyclin გენეტიკურად ურთიერთქმედებს სხვა Cyclin გენებთან, რომლებიც ხელს უწყობენ უჯრედის ციკლის დაწყებას

ბოლო შეკითხვა, რომელსაც ჩვენ მივმართეთ, ეხება Pas1p და სხვა G– ს ფუნქციურ ურთიერთობას1 ციკლინები დაშლის საფუარი შეიცავს სამი სახის G- ს1 ციკლინები, Cig1/2p, Puc1p და Pas1p, რომლებიც ფიქრობენ, რომ აქვთ აქტივობა G– ის რეგულირებისთვის1-S გადასვლა. ან Cig1p ან Cig2p აუცილებელია S ფაზის დასაწყებად Cdc13 მიტოზური ციკლინის არარსებობისას (Fisher and Nurse, 1996 Mondesert და სხვები, 1996) და ეს ციკლინები მოქმედებენ Res-Cdc10p-Rep (Baum და სხვები, 1997). Puc1p ასევე მოქმედებს G- ში1-S გადასვლა, მაგრამ ეს აქტივობა გამოვლენილია მხოლოდ Δcig1 Δcig2ფონზე (მარტინ-კასტელანოსი და სხვები, 2000) (სურათი 8C). თუმცა, ეს ციკლინი არ აჩვენებს რაიმე გამოვლენილ ურთიერთქმედებას Res-Cdc10p-Rep– თან, მიუხედავად მისი საფუარის საფუარის Cln cyclins– ის სტრუქტურული მსგავსებისა.

ნახ. 8. გენეტიკური ურთიერთქმედებაpas1 + სხვა გ1 ციკლინის გენები. (ა) ტემპერატურისადმი მგრძნობიარე ზრდის ფენოტიპი Δcig1 Δcig2 Δpuc1 Δpas1 ოთხმაგი მუტანტი. ველური ტიპის (L972), სამმაგი ნულოვანი მუტანტები (K224-4D, K224-51C, K224-59C, K224-35D) და ოთხმაგი ნულოვანი მუტანტის (K224-42D) უჯრედები ინოკულაციულ იქნა MMA ფირფიტებზე და ინკუბაცია მითითებულ ტემპერატურაზე 3 დღის განმავლობაში (ბ) Δcig1 Δcig2 Δpuc1 Δpas1 ოთხმაგი მუტანტური უჯრედი აჩერებს cdc ფენოტიპს 36 ° C ტემპერატურაზე. უჯრედები დაინერგა MMA ფირფიტებზე და ინკუბაცია მითითებულ ტემპერატურაზე 18 სთ. (გ) Δcig1 Δcig2 Δpuc1 Δpas1 ოთხჯერ მუტანტური უჯრედები იჭერენ გ1 36 ° C ტემპერატურაზე. უჯრედები გაშენებულია MM (+N/2%G) შუალედურ ფაზაში 30 ° C ტემპერატურაზე (ზედა პანელები), გადაინაცვლებს 36 ° C- მდე, ინკუბაცია ხდება 3 სთ (ქვედა პანელები) და გაანალიზებულია ნაკადის ციტომეტრიით. (დ) ტერმინალური უჯრედის მორფოლოგია Δcig1 Δcig2 Δpuc1 Δrep2 ოთხჯერ მუტანტური უჯრედები. გადაკვეთის შედეგად წარმოქმნილი სპორები Δcig1 Δcig2 Δpuc1 უჯრედები ერთად Δrep2 ჰაპლოიდური შტამი იყო ტეტრადი დანაწევრებული YEA ფირფიტებზე და ინკუბაცია 30 ° C ტემპერატურაზე. უჯრედები, რომლებიც აღმოცენდნენ ოთხი დამოუკიდებელიდან Δcig1 Δcig2 Δpuc1 Δrep2 ოთხმაგი წაშლის სპორები (პანელები 1-4) (შეფასებულია დანარჩენი სამი სეგრეგანტის გენოტიპების მიხედვით) გადაღებულია მიკროსკოპის ქვეშ. (ე) ჩახშობა Δcig1 Δcig2 Δpuc1 Δpas1 ოთხმაგი მუტანტი მიერres1 + და რეპ 2 + გენი. ოთხმაგი ნულოვანი მუტანტური უჯრედები (K226-42A) გარდაიქმნა მითითებული პლაზმიდებით, დაიდო MMA ფირფიტებზე და ინკუბაცია მითითებულ ტემპერატურაზე. pcL-X არის pcL ვექტორი ჩანართის გარეშე და გამოიყენება როგორც უარყოფითი კონტროლი.

ამ ფაქტების გათვალისწინებით, ჩვენ გამოვიკვლიეთ გენეტიკური ურთიერთქმედებაpas1 + სხვა გ1ციკლინის გენები სამმაგი და ოთხმაგი მოცილების მუტანტების კონსტრუქციით აკლია სიგარეტი 1 + ,სიგარეტი 2 + , puc1 +, ან/და pas1 + 30 ° C ტემპერატურაზე,Δcig1 Δcig2 Δpuc1 Δpas1 ოთხმაგი მუტანტური უჯრედი სიცოცხლისუნარიანი იყო (სურათი 8A) და გამრავლდა უჯრედების მცირე გახანგრძლივებით (სურათი 8B), რომელსაც თან ახლავს ნათელი G1პიკი, მიუთითებს ნელ G- ზე1 პროგრესია (სურათი 8C). მუტანტი, თუმცა, ვერ გავრცელდა 36 ° C ტემპერატურაზე (სურათი 8A). ამ ტემპერატურაზე გადასვლისთანავე მუტანტი დაპატიმრდა გ1 უჯრედის დრეკადობით, ტიპიური აCDC ფენოტიპი (სურათი 8, B და C). ამრიგად, ოთხ ციკლინს Cig1p, Cig2p, Puc1p და Pas1p აქვს გარკვეული ხარისხის ფუნქციური სიჭარბე, თუმცა ამ ციკლინების მოქმედების ძირითადი სამიზნეები მნიშვნელოვნად განსხვავდება.

გენეტიკური ურთიერთქმედება pas1 + სხვა ციკლინებთან ერთად სავარაუდოდ Res2p-Cdc10p გააქტიურების არაპირდაპირი ეფექტია, რადგან სპორები აკლია სიგარეტი 1 + ,სიგარეტი 2 + , puc1 +, და რეპ 2 + ნაცვლადpas1 + აღმოცენდა და გავრცელდა რამდენჯერმე, მაგრამ შეწყვიტა პროლიფერაცია 30 ° C ტემპერატურაზე უჯრედების გახანგრძლივებით (სურათი 8D). გარდა ამისა, ტემპერატურისადმი მგრძნობიარე გავრცელებაΔcig1 Δcig2 Δpuc1 Δpas1 ოთხმაგი მუტანტი ეფექტურად იქნა ჩახშობილი მისი ზედმეტი გამოხატვის შედეგადres1 + ან რეპ 2 + (სურათი 8E). ეს შედეგები მიუთითებს იმაზე, რომ Pas1 ციკლინი გენეტიკურად ურთიერთქმედებს სხვა გ1 ციკლინები Rep2p-Cdc10p კომპლექსის გააქტიურების გზით.


Tie2 და Eph რეცეპტორი ტიროზინ კინაზას გააქტიურება და სიგნალიზაცია

Eph და Tie უჯრედის ზედაპირის რეცეპტორები შუამავლობენ სხვადასხვა სასიგნალო მოვლენებს განვითარების დროს და ზრდასრულ ორგანიზმში. როგორც სხვა რეცეპტორების ტიროზინ კინაზები, ისინი გააქტიურებულია უჯრედული ლიგანდების შეკავშირებისას და მათი კატალიზური აქტივობა მჭიდროდ რეგულირდება მრავალ დონეზე. Eph და Tie რეცეპტორები აჩვენებენ ზოგიერთ უნიკალურ მახასიათებელს, მათ შორის ლიგანდებით გამოწვეული რეცეპტორების კლასტერული მოთხოვნილების ეფექტურ სიგნალიზაციას. საინტერესოა, რომ ორივე ეფესს და კავშირს შეუძლიათ განსხვავებული, თუნდაც საპირისპირო ბიოლოგიური ეფექტების შუამავლობა, რაც დამოკიდებულია კონკრეტული ლიგანდის რეაქციის გამომწვევზე და უჯრედულ კონტექსტზე. აქ ჩვენ განვიხილავთ ამ რეცეპტორების სტრუქტურულ მახასიათებლებს, მათ ურთიერთქმედებას სხვადასხვა ლიგანდებთან, ასევე ფუნქციონალურ გავლენას ქვემო სიგნალის დაწყებისათვის. Eph/ephrin სტრუქტურები უკვე კარგად არის განხილული და ჩვენ მხოლოდ მოკლე მიმოხილვას ვაძლევთ საწყის სავალდებულო მოვლენებს. ჩვენ უფრო დეტალურად განვიხილავთ ჰალსტუხი-ანგიოპოეტინის სტრუქტურებსა და აღიარებას.

ფიგურები

ჰალსტუხის სქემატური წარმოდგენა…

ჰალსტუხის რეცეპტორებისა და ანგიოპოეტინის ლიგანდების სქემატური წარმოდგენა. ჰალსტუხის რეცეპტორები არიან…

ანგიოპოეტინის ბროლის სტრუქტურები ...

ანგიოპოეტინის რეცეპტორების სავალდებულო დომენების კრისტალური სტრუქტურები და Tie2 ექტოდომენი შეუზღუდავია ...

Tie2– ის სტრუქტურა…

Tie2 TKD სტრუქტურა. ორი ხედი 90 ° -ით ბრუნავდა y…

ჰალსტუხი-ანგიოპოეტინის სიგნალის მოდელი. …

ჰალსტუხი-ანგიოპოეტინის სიგნალის მოდელი. ანგიოპოეტინის ზრდის ფაქტორები იწყებენ რთულ სასიგნალო გზებს…

A და…

A და B ტიპის ეფრინებისა და Eph რეცეპტორების სქემატური წარმოდგენა. ნაჩვენებია…

ეფეს სქემატური პრეზენტაცია…

Eph რეცეპტორების სქემატური პრეზენტაცია, რომლებიც დაკავშირებულია ეფრინ ლიგანდებთან უჯრედულ უჯრედში…


ცნობები

ბარგმანი, C.I. ქიმიოსენსიბილიზაცია C. elegans. WormBook 1–29 (2006).

რობერტსონი, ჰ.მ. & ამპასი ტომასი, ჯ.ჰ. სავარაუდო ქიმიორეცეპტორების ოჯახები C. elegans. WormBook 1–12 (2006).

Antebi, A. ბირთვული რეცეპტორების სიგნალის გადაცემა in C. elegans. WormBook 1–49 (2015).

მოტოლა, დ.ლ. და სხვები DAF-12– ის ლიგანდების იდენტიფიცირება, რომლებიც არეგულირებენ დაუერის ფორმირებას და რეპროდუქციას C. elegans. უჯრედი 124, 1209–1223 (2006).

ჯონგი, P.Y. და სხვები ქიმიური სტრუქტურა და ბიოლოგიური აქტივობა Caenorhabditis elegans დაუერის გამომწვევი ფერომონი. Ბუნება 433, 541–545 (2005).

ყასაბი, R.A., Fujita, M., Schroeder, F.C. & amp კლარდი, ჯ. მცირე მოლეკულის ფერომონები, რომლებიც აკონტროლებენ დაუერის განვითარებას Caenorhabditis elegans. ნათ. ქიმიის ბიოლი 3, 420–422 (2007).

ყასაბი, R.A., Ragains, J.R., Kim, E. & amp Clardy, J. ძლიერი დაუერ ფერომონის კომპონენტი Caenorhabditis elegans რომელიც სინერგიულად მოქმედებს სხვა კომპონენტებთან. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 105, 14288–14292 (2008).

ყასაბი, R.A., Ragains, J.R. & amp Clardy, J. ინდოლის შემცველი დაუერ ფერომონის კომპონენტი უჩვეულო დაუერ ინჰიბიტორული აქტივობით უფრო მაღალი კონცენტრაციით. ორგ. Lett. 11, 3100–3103 (2009).

Pungaliya, C. et al. მცირე მოლეკულური სიგნალების იდენტიფიკაციის მალსახმობი, რომლებიც არეგულირებენ ქცევას და განვითარებას Caenorhabditis elegans. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 106, 7708–7713 (2009).

ბაუ, ლ.რ. გაიზარდოს თუ არ გაიზარდოს: განვითარების კვების კონტროლი დროს Caenorhabditis elegans L1 დაპატიმრება. გენეტიკა 194, 539–555 (2013).

შინდლერი, A.J., Baugh, L.R. & amp შერვუდი, დ.რ. გვიანი ლარვის სტადიის განვითარების გამშვები პუნქტების იდენტიფიკაცია Caenorhabditis elegans რეგულირდება ინსულინის/IGF და სტეროიდული ჰორმონის სასიგნალო გზებით. PLoS Genet. 10, e1004426 (2014).

Angelo, G. & amp Van Gilst, M.R. შიმშილი იცავს ჩანასახოვან ღეროვან უჯრედებს და აგრძელებს რეპროდუქციულ ხანგრძლივობას C. elegans. მეცნიერება 326, 954–958 (2009).

სეიდელი, ჰ.ს. & amp Kimble, J. ოოგენური ჩანასახების შიმშილის რეაქცია C. elegans. PLoS One 6, e28074 (2011).

კასადა, რ. & amp Russell, R.L. Dauer larva, პოსტ-ემბრიონული განვითარების ვარიანტი ნემატოდის Caenorhabditis elegans. დევ. ბიოლი 46, 326–342 (1975).

ნარბონი, პ. და ამპი როი, რ. Caenorhabditis elegans დაუერებს სჭირდებათ LKB1/AMPK ლიპიდების რეზერვების რაციონირებისა და გრძელვადიანი გადარჩენის უზრუნველსაყოფად. Ბუნება 457, 210–214 (2009).

Erkut, C., Gade, V.R., Laxman, S. & amp Kurzchalia, T.V. გლიოქსილატის შუნტი აუცილებელია გამოშრობის ტოლერანტობისათვის C. elegans და დაფქული საფუარი. eLife 5, e13614 (2016).

Wadsworth, W.G. & amp რიდლი, D.L. ენერგეტიკული მეტაბოლიზმის განვითარების რეგულირება Caenorhabditis elegans. დევ. ბიოლი 132, 167–173 (1989).

პენკოვი, ს. და სხვ. ნახშირწყლების მეტაბოლიზმის და რედოქსული მდგომარეობის ინტეგრაცია აკონტროლებს დაუერ ლარვის წარმოქმნას Caenorhabditis elegans. ნათ. კომუნი. 6, 8060 (2015).

ერკუტი, C. et al. Trehalose ხდის dauer larva of Caenorhabditis elegans მდგრადია უკიდურესი გაშრობის მიმართ. კურრი ბიოლი 21, 1331–1336 (2011).

მერფი, C.T. და სხვები გენები, რომლებიც მოქმედებენ DAF-16– ის ქვემოთ და ახდენენ გავლენას სიცოცხლის ხანგრძლივობაზე Caenorhabditis elegans. Ბუნება 424, 277–283 (2003).

მაკელვი, ჯ.ჯ., შუსტერი, ე., ბლანი, ე., ტომასი, ჯ.ჰ. & amp Gems, D. გაზიარებული ტრანსკრიპციული ხელმოწერა Caenorhabditis elegans dauer larvae და ხანგრძლივი დაფ -2 მუტანტები მონაწილეობენ დეტოქსიკაციის სისტემაში ხანგრძლივობის უზრუნველყოფაში. ჯ ბიოლი. ქიმიის 279, 44533–44543 (2004).

შოუ, W.M., Luo, S., Landis, J., Ashraf, J. & amp Murphy, C.T. ის C. elegans TGF-β dauer გზა არეგულირებს ხანგრძლივობას ინსულინის სიგნალის საშუალებით. კურრი ბიოლი 17, 1635–1645 (2007).

Félix, MA და amp Duveau, F. მოსახლეობის დინამიკა და ბუნებრივი პოპულაციების ჰაბიტატების გაზიარება Caenorhabditis elegans და C. briggsae. BMC ბიოლი. 10, 59 (2012).

Fielenbach, N. & amp Antebi, A. C. elegans დაუერის წარმოქმნა და პლასტიურობის მოლეკულური საფუძველი. გენები დევ. 22, 2149–2165 (2008).

ჰუ, P.J. Dauer. WormBook 1–19 (2007).

Hsin, H. & amp Kenyon, C. რეპროდუქციული სისტემის სიგნალები არეგულირებს სიცოცხლის ხანგრძლივობას C. elegans. Ბუნება 399, 362–366 (1999).

Gerisch, B. et al. ნაღვლის მჟავის მსგავსი სტეროიდი მოდულირდება Caenorhabditis elegans სიცოცხლის ხანგრძლივობა ბირთვული რეცეპტორების სიგნალის საშუალებით. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 104, 5014–5019 (2007).

Gerisch, B., Weitzel, C., Kober-Eisermann, C., Rottiers, V. & amp Antebi, A. ჰორმონალური სასიგნალო გზა გავლენას ახდენს C. elegans მეტაბოლიზმი, რეპროდუქციული განვითარება და სიცოცხლის ხანგრძლივობა. დევ. უჯრედი 1, 841–851 (2001).

გოლდენ, ჯ. ვ. & amp რიდლი, D.L. ფერომონი გავლენას ახდენს ლარვის განვითარებაზე ნემატოდში Caenorhabditis elegans. მეცნიერება 218, 578–580 (1982).

გოლდენ, ჯ. ვ. & amp რიდლი, D.L. ა Caenorhabditis elegans დაუერის გამომწვევი ფერომონი და საკვების მარაგის ანტაგონისტური კომპონენტი. ჯ. ქიმი. ეკოლ. 10, 1265–1280 (1984).

ჟანგი, X., Noguez, J.H., Zhou, Y. & amp Butcher, R.A. საწყისი ასკაროზიდების საწყისი Caenorhabditis elegans მასის სპექტრომეტრიისა და NMR სპექტროსკოპიის გამოყენებით. მეთოდები მოლ. ბიოლი 1068, 71–92 (2013).

სრინივასანი, ჯ და სხვები. მცირე მოლეკულური სიგნალების მოდულური ბიბლიოთეკა არეგულირებს სოციალურ ქცევებს Caenorhabditis elegans. PLoS ბიოლ. 10, e1001237 (2012).

ფონ რეუსი, ს.ჰ. და სხვები შედარებითი მეტაბოლიზმი ავლენს ასკაროზიდების ბიოგენეზს, მცირე მოლეკულური სიგნალების მოდულურ ბიბლიოთეკას C. elegans. ჯ. ამ. ქიმიის სოც. 134, 1817–1824 (2012). ამ ნაშრომმა შეიმუშავა LC -MS/MS ტექნიკა ნედლი ექსტრაქტში არსებული ასკაროზიდების სწრაფად გასაანალიზებლად, რაც უაღრესად სასარგებლო აღმოჩნდა ასკაროზიდების დასახასიათებლად სხვადასხვა ნემატოდების სახეობებში და მუტანტებში ასკაროზიდის ბიოსინთეზურ გზაზე..

სრინივასანი, ჯ და სხვები. მცირე მოლეკულების ნაზავი არეგულირებს შეჯვარებას და განვითარებას Caenorhabditis elegans. Ბუნება 454, 1115–1118 (2008).

იზრაელიტი, ი. და სხვები. მიზნობრივი მეტაბოლიზმი ავლენს მამაკაცის ფერომონს და სქესის სპეციფიკურ ასკაროზიდის ბიოსინთეზს Caenorhabditis elegans. ACS ქიმიური. ბიოლი 7, 1321–1325 (2012).

მაკოსკო, ე.ზ. და სხვები კვანძოვანი და დინამიური წრე ამოძრავებს ფერომონის მოზიდვას და სოციალურ ქცევას C. elegans. Ბუნება 458, 1171–1175 (2009).

არტიუხინი, ა.ბ. და სხვები სუკინილირებული ოქტოპამინის ასკაროზიდები და ბიოგენური ამინის მეტაბოლიზმის ახალი გზა Caenorhabditis elegans. ჯ ბიოლი. ქიმიის 288, 18778–18783 (2013).

გრინი, ჯ. და სხვები შერჩევის დაბალანსება აყალიბებს სიმკვრივეზე დამოკიდებული საკვების ქცევას. Ბუნება 539, 254–258 (2016).

გრინი, J.S., Dobosiewicz, M., Butcher, R.A., McGrath, P.T. & amp Bargmann, C.I. ორი ქიმიორეცეპტორის გენის მარეგულირებელი ცვლილებები ხელს უწყობს ა Caenorhabditis elegans QTL საკვების მოსაპოვებლად. eLife 5, e21454 (2016).

კიმი, კ. და სხვები ორი ქიმიორეცეპტორი შუამავლობს დაუერ ფერომონის განვითარების ეფექტებს C. elegans. მეცნიერება 326, 994–998 (2009). ამ ნაშრომში გამოვლენილია ასკაროზიდების პირველი GPCR სამიზნეები.

მაკგრატი, პ.ტ.და სხვები მოშინაურების პარალელური ევოლუცია კაენორჰაბდიტი სახეობა მიზნად ისახავს ფერომონის რეცეპტორის გენებს. Ბუნება 477, 321–325 (2011). ეს ნაშრომი გამოიყენება ფერომონისადმი მგრძნობიარე და უგრძნობი C. elegans შტამები და რაოდენობრივი თვისებების ლოკუსების რუქა ასკაროზიდების GPCR სამიზნეების ახალი ოჯახის დასადგენად.

პარკი, დ და სხვები სტრუქტურის სპეციფიკური და გარყვნილი G- პროტეინთან დაკავშირებული რეცეპტორების ურთიერთქმედება ხელს უწყობს მცირე მოლეკულის სიგნალიზაციას Caenorhabditis elegans. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 109, 9917–9922 (2012).

Choe, A. et al. ასკაროზიდის სიგნალი ფართოდ არის დაცული ნემატოდებში. კურრი ბიოლი 22, 772–780 (2012).

ნოგესი, ჯ.ჰ. და სხვები რომანი ასკაროზიდი აკონტროლებს ენტომოპათოგენური ნემატოდის პარაზიტულ სასიცოცხლო ციკლს ბაქტერიოფორა ჰეტერორაბდიტი. ACS ქიმიური. ბიოლი 7, 961–966 (2012).

Bose, N. et al. მცირე მოლეკულის რთული არქიტექტურა არეგულირებს ფენოტიპურ პლასტიკას ნემატოდში. ანჯუ. ქიმიის ინტერ ედნ ინგლ. 51, 12438–12443 (2012). ამ სტატიამ აჩვენა, რომ ნემატოდი P. pacificus აწარმოებს ბევრად უფრო რთულ ასკაროზიდულ არქიტექტურას, ვიდრე სხვა ნემატოდების სახეობებში, რომლებიც მოიცავს მეტაბოლიზმის წარმოშობის მრავალ სხვადასხვა სახეობას.

იიმი, ჯ.ჯ., ბოსე, ნ., მეიერი, ჯ.მ., სომერი, რ.ჯ. & amp შრედერი, F.C. ნემატოდის სასიგნალო მოლეკულები წარმოიქმნება პირველადი მეტაბოლური სამშენებლო ბლოკების მულტიმოდულური შეკრებიდან. ორგ. Lett. 17, 1648–1651 (2015).

ჟაო, ლ და სხვ. ასკაროზიდები კოორდინირებენ მცენარე-პარაზიტული ნემატოდის გაფანტვას მისი ვექტორ ხოჭოს მეტამორფოზასთან. ნათ. კომუნი. 7, 12341 (2016). ეს ნაშრომი იყო პირველი, რომელმაც აღმოაჩინა ასკაროზიდები სხვა ორგანიზმში, ნემატოდის გარდა, კერძოდ, ფიჭვის ნემატოდის ვექტორის ხოჭო.

Choe, A. et al. სქესის სპეციფიკური შეჯვარების ფერომონები ნემატოდებში Panagrellus redivivus. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 109, 20949–20954 (2012).

მანოსალვა, პ. და სხვ. ნემატოდების სასიგნალო მოლეკულები იწვევენ მცენარეთა დაცვას და პათოგენურ წინააღმდეგობას. ნათ. კომუნი. 6, 7795 (2015).

Dong, C., Dolke, F. & amp von Reuss, S.H. შერჩევითი MS სკრინინგი ავლენს სქესის ფერომონს კაენორჰაბდიტი ბრიგსაე და სახეობების სპეციფიკა ინდოლის ასკაროზიდის სიგნალში. ორგ. ბიომოლი. ქიმიის 14, 7217–7225 (2016).

ბენტო, გ., ოგავა, ა. და ამპერი სომერი, რ. ჯ. ჰორმონის სასიგნალო მოდულის დაფაქრონის მჟავა-DAF-12 ერთობლივი ვარიანტი ნემატოდების ევოლუციაში. Ბუნება 466, 494–497 (2010).

Bose, N. et al. დაუერ ფერომონის წარმოებისა და შეგრძნების ბუნებრივი ცვალებადობა ხელს უწყობს ნემატოდებში ინტრასპეციფიკურ კონკურენციას. კურრი ბიოლი 24, 1536–1541 (2014).

პენკოვი, ს. და სხვ. ცვილის ესტერი ხელს უწყობს კოლექტიური მასპინძლის აღმოჩენას ნემატოდში Pristionchus pacificus. ნათ. ქიმიის ბიოლი 10, 281–285 (2014).

ჟაო, ლ., მოტა, მ., ვიეირა, პ., ყასაბი, რ.ა. & amp Sun, J. ინტერსპექტური კომუნიკაცია ფიჭვის ნემატოდას, მის მწერების ვექტორსა და მასთან დაკავშირებულ მიკრობებს შორის. ტენდენციები პარაზიტოლი. 30, 299–308 (2014).

ჟაო, L.L., Wei, W., Kang, L. & amp Sun, J.H. ფიჭვის ნემატოდის ქიმიოტაქსია, Bursaphelenchus xylophilus, მასპინძელ ფიჭვთან, Pinus massoniana– სთან და მის ვექტორთან ასოცირებული არასტაბილურებთან Monochamus alternatus. ჯ. ქიმი. ეკოლ. 33, 1207–1216 (2007).

ჟაო, ლ და სხვ. ქიმიური სიგნალები სინქრონიზაციას უწევს მცენარეთა პარაზიტული ნემატოდისა და მისი ვექტორ ხოჭოს სიცოცხლის ციკლს. კურრი ბიოლი 23, 2038–2043 (2013).

Zagoriy, V., Matyash, V. & amp Kurzchalia, T. გრძელი ჯაჭვი -ასკაროზილ-ალკანედიოლი არის შემადგენელი კომპონენტები Caenorhabditis elegans მაგრამ არ გამოიწვიოს დაუერ ლარვის წარმოქმნა. ქიმიის ბიოდივერსიორები. 7, 2016–2022 (2010).

ჯეზიკი, პ.ფ. & amp Fairbairn, D. Ascarosides and ascaroside esters in ასკარის ლუმბრიკოიდები (ნემატოდა). კომპ. ბიოქიმია. ფიზიოლი 23, 691–705 (1967).

ბარტლი, ჯ.პ., ბენეტი, ე.ა. & amp Darben, P.A. ასკაროზიდების სტრუქტურა Ascaris suum. ჯ. ნათ. პროდ 59, 921–926 (1996).

Fairbairn, D. ბიოქიმია ასკარის. გასვლა პარაზიტოლი. 6, 491–554 (1957).

ყასაბი, რ.ა. და სხვები ბიოსინთეზი Caenorhabditis elegans დაუერ ფერომონი. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 106, 1875–1879 (2009).

იზრაელიტი, Y., Robinette, S.L., Bose, N., von Reuss, S.H. & amp შრედერი, F.C. 2D NMR დაფუძნებული მეტაბოლიზმი ავლენს ურთიერთქმედებას კონსერვატიულ ბიოქიმიურ გზებს შორის მოდელ ორგანიზმში Caenorhabditis elegans. ACS ქიმიური. ბიოლი 8, 314–319 (2013).

ჟანგი, X. და სხვ. Acyl-CoA ოქსიდაზას კომპლექსები აკონტროლებენ ქიმიური შეტყობინებების წარმოქმნას Caenorhabditis elegans. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 112, 3955–3960 (2015). ამ ნაშრომმა უშუალოდ აჩვენა ასკაროზიდის ბიოსინთეზში ჩართული სამი ACOX ფერმენტის სუბსტრატის უპირატესობა და აჩვენა, თუ როგორ ასრულებენ ისინი ძირითად როლს იმის განსაზღვრისას, თუ რომელი ასკაროზიდები წარმოიქმნება C. elegans.

ჯონსონი, D.A. & amp Liu, H. მექანიზმები და გზები დეოქსიზუგარის ბიოსინთეზის ბოლოდროინდელი კვლევებიდან. კურრი მოსაზრება. ქიმიის ბიოლი 2, 642–649 (1998).

Olson, S.K., Greenan, G., Desai, A., Müller-Reichert, T. & amp Oegema, K. კვერცხუჯრედის იერარქიული შეკრება და გამტარიანობის ბარიერი C. elegans. ჯ. უჯრე ბიოლი. 198, 731–748 (2012).

კარვალიო, ა. და სხვები. მწვავე მედიკამენტური მკურნალობა ადრეულ ეტაპზე C. elegans ემბრიონი PLoS One 6, e24656 (2011).

ჯო, ჰ.ჯ. და სხვები Caenorhabditis elegans იყენებს დაუერ ფერომონის ბიოსინთეზს უჯრედული ჰომეოსტაზის ტოქსიკური პეროქსიზომული ცხიმოვანი მჟავების განკარგვის მიზნით. ბიოქიმია. ჯ. 422, 61–71 (2009).

ჯო, ჰ.ჯ და სხვები პეროქსიზომული წვლილის შეტანა აკოქსი გენი დაუმონის წარმოების დინამიურ ბალანსში Caenorhabditis elegans. ჯ ბიოლი. ქიმიის 285, 29319–29325 (2010).

ჟანგი, X., Li, K., Jones, R.A., Bruner, S.D. & გამაძლიერებელი, რ.ა. აცილ-CoA ოქსიდაზების სტრუქტურული დახასიათება ცხადყოფს პირდაპირ კავშირს ფერომონის ბიოსინთეზსა და მეტაბოლურ მდგომარეობას შორის Caenorhabditis elegans. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 113, 10055–10060 (2016). ამ ნაშრომმა მოიპოვა ACOX ფერმენტების პირველი კრისტალური სტრუქტურა, შექმნას სტრუქტურა მათი სუბსტრატის სპეციფიკისთვის და ასევე გამოავლინა ATP სავალდებულო ადგილი, რომელიც არეგულირებს ფერმენტულ მოქმედებას.

ჯო, ჰ.ჯ. და სხვები HSF-1 მონაწილეობს ასკაროზიდის ფერომონის ბიოსინთეზის რეგულირებაში სითბოს სტრესის შედეგად Caenorhabditis elegans. ბიოქიმია. ჯ. 473, 789–796 (2016).

კაპლანი, ფ. და სხვ. ასკაროზიდის გამოხატულება Caenorhabditis elegans დიდად არის დამოკიდებული დიეტაზე და განვითარების სტადიაზე. PLoS One 6, e17804 (2011).

იამავაკი, თ.მ. და სხვები სომატური რეპროდუქციული ქსოვილები C. elegans სტეროიდული ჰორმონების სიგნალიზაციის გზით ხანგრძლივობის გაზრდა. PLoS ბიოლ. 8, e1000468 (2010).

Shen, Y., Wollam, J., Magner, D., Karalay, O. & amp Antebi, A. სტეროიდული რეცეპტორ-მიკრორნმ-ის გადამრთველი არეგულირებს სიცოცხლის ხანგრძლივობას გონადის სიგნალების საპასუხოდ. მეცნიერება 338, 1472–1476 (2012).

ჯია, კ., ალბერტი, პ.ს. & amp რიდლი, D.L. DAF-9, ციტოქრომ P450 მარეგულირებელი C. elegans ლარვის განვითარება და ზრდასრული სიცოცხლის ხანგრძლივობა. განვითარება 129, 221–231 (2002).

Mahanti, P. et al. შედარებითი მეტაბოლიზმი ავლენს DAF-12– ის ენდოგენურ ლიგანდებს, ბირთვული ჰორმონის რეცეპტორს, მარეგულირებელ C. elegans განვითარება და სიცოცხლის ხანგრძლივობა. უჯრედის მეტაბ. 19, 73–83 (2014). ეს ნაშრომი წარმოადგენდა მასში შემავალ ძირითად ბიოაქტიურ დაფაქრონულ მჟავებს გადახედულ ანალიზს C. elegans.

როტიერი, ვ და სხვები. ჰორმონალური კონტროლი C. elegans დაუერის წარმოქმნა და სიცოცხლის ხანგრძლივობა რისკის მსგავსი ოქსიგენაზით. დევ. უჯრედი 10, 473–482 (2006).

Wollam, J. et al. რომანი 3-ჰიდროქსიტეროიდული დეჰიდროგენაზა, რომელიც არეგულირებს რეპროდუქციულ განვითარებას და ხანგრძლივობას. PLoS ბიოლ. 10, e1001305 (2012).

Patel, D.S., Fang, L.L., Svy, D.K., Ruvkun, G. & amp Li, W. HSD-1 გენეტიკური იდენტიფიკაცია, კონსერვატიული სტეროიდოგენური ფერმენტი, რომელიც ხელმძღვანელობს ლარვის განვითარებას Caenorhabditis elegans. განვითარება 135, 2239–2249 (2008).

Gerisch, B. & amp Antebi, A. ჰორმონალური სიგნალები წარმოებული DAF-9/ციტოქრომ P450 არეგულირებს C. elegans დაუერ დიაპაუზა გარემოსდაცვითი ნიშნების საპასუხოდ. განვითარება 131, 1765–1776 (2004).

მაკ, ჰ.ი. & amp Ruvkun, G. უჯრედული სიგნალი რეპროდუქციული განვითარების მიერ C. elegans DAF-9 ციტოქრომ P450. განვითარება 131, 1777–1786 (2004).

მატიაშ, ვ და სხვ. სტეროლისგან მიღებული ჰორმონი (ები) აკონტროლებს დიაპაუზაში შესვლას Caenorhabditis elegans DAF-12 და DAF-16 თანმიმდევრული გააქტიურებით. PLoS ბიოლ. 2, e280 (2004).

ჰანიჩი, ჯ.თ. და სხვები სტეროლის ბირთვის მეთილირება STRM-1– ით არეგულირებს დაუერ ლარვის წარმოქმნას Caenorhabditis elegans. დევ. უჯრედი 16, 833–843 (2009).

ლუჩიანი, გ.მ. და სხვები დაფადინი აფერხებს DAF-9– ს, რათა ხელი შეუწყოს დაუერის წარმოქმნას და ხანგრძლივობას Caenorhabditis elegans. ნათ. ქიმიის ბიოლი 7, 891–893 (2011).

Schaedel, O.N., Gerisch, B., Antebi, A. & amp Sternberg, P.W. ჰორმონალური სიგნალის გაძლიერება შუამავლობს გარემო პირობებს განვითარების დროს და აკონტროლებს ზრდასრულობისადმი შეუქცევად ვალდებულებას. PLoS ბიოლ. 10, e1001306 (2012).

ჯუდკინსი, J.C. და სხვები ნიღბიანი ბირთვული რეცეპტორებით დაფარული ნიღბით შესაძლებელია დროებითი კონტროლი C.elegans განვითარება. ანჯუ. ქიმიის ინტერ ედნ ინგლ. 53, 2110–2113 (2014).

ოგავა, ა., სტრეიტი, ა., ანტები, ა. და ამპერი სომერი, რ. ჯ. კონსერვატიული ენდოკრინული მექანიზმი აკონტროლებს ნეიტოდებში დაუერ და ინფექციური ლარვების წარმოქმნას. კურრი ბიოლი 19, 67–71 (2009).

ვანგი, ზ. და სხვები. ბირთვული რეცეპტორის DAF-12 იდენტიფიკაცია, როგორც თერაპიული სამიზნე პარაზიტულ ნემატოდებში. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 106, 9138–9143 (2009).

ჟი, X. და სხვ. ლიგანდის შეკავშირების სტრუქტურული კონსერვაცია ავლენს ნაღვლის მჟავას მსგავსი სასიგნალო გზას ნემატოდებში. ჯ ბიოლი. ქიმიის 287, 4894–4903 (2012).

ალბარქი, მ.მ. და სხვები სასიცოცხლო ციკლის გამშვები პუნქტების რეგულირება და ინფექციური ლარვების განვითარების გააქტიურება Strongyloides stercoralis დაფაფრონის მჟავით. PLoS პათოგენი. 12, e1005358 (2016).

ბაუ, ლ.რ. & amp შტერნბერგი, პ.ვ. DAF-16/FOXO არეგულირებს ტრანსკრიფციას cki-1/Cip/Kip და რეპრესია lin-4 დროს C. elegans L1 დაპატიმრება. კურრი ბიოლი 16, 780–785 (2006).

ჩენ, ი. და ამპ ბაუ, ლ.რ. Ins-4 და daf-28 ზედმეტად რეგულირებადი ფუნქცია C. elegans L1 დაპატიმრება. დევ. ბიოლი 394, 314–326 (2014).

ლი, ბ.ჰ. & amp Ashrafi, K. TRPV არხი მოდულირდება C. elegans ნეიროესკრეცია, ლარვის შიმშილის გადარჩენა და ზრდასრული ადამიანის სიცოცხლე. PLoS Genet. 4, e1000213 (2008).

ფუკუიამა, მ და სხვები. C. elegans AMPK– ​​ები ხელს უწყობენ გადარჩენას და აჩერებენ ჩანასახის განვითარებას მკვებავი სტრესის დროს. ბიოლი გახსნა 1, 929–936 (2012).

ფუკუიამა, მ., კონტანი, კ., კატადა, თ. & Amp Rougvie, A.E. The C. elegans ჰიპოდერმი წყვილების უჯრედების წინამორბედი წყვეტს დიეტურ მდგომარეობას. კურრი ბიოლი 25, 1241–1248 (2015).

შოუ, ქ. და სხვები ჰიბრიდული პოლიკეტიდ-არარიბოსომული პეპტიდი ნემატოდებში, რომელიც ხელს უწყობს ლარვის გადარჩენას. ნათ. ქიმიის ბიოლი 12, 770–772 (2016). ამ ნაშრომმა გამოავლინა ცხოველის პირველი ჰიბრიდული პოლიკეტიდი – არარიბოსომული პეპტიდი და აჩვენა, რომ ის გავლენას ახდენს შიმშილის გადარჩენაზე C. elegans.

O'Brien, R.V., Davis, R.W., Khosla, C. & amp Hillenmeyer, M.E. ობოლი შეკრების ხაზის პოლიკეტიდის სინთეზების გამოთვლა და ანალიზი. ჯ ანტიბიოტიკი. (ტოკიო) 67, 89–97 (2014).

Wang, H., Fewer, D.P., Holm, L., Rouhiainen, L. & amp. Sivonen, K. არარიბოსომული პეპტიდისა და პოლიკეტიდის ბიოსინთეზური გზების ატლასი ავლენს არამოდულური ფერმენტების საერთო წარმოშობას. პროკ. ნათლ. აკად. მეცნიერება აშშ 111, 9259–9264 (2014).

არტიუხინი, ა.ბ., შრედერი, ფ. & amp; ევერი, L. სიმჭიდროვეზე დამოკიდებულება კაენორჰაბდიტი ლარვის შიმშილი. მეცნიერება რეპ. 3, 2777 (2013).

მოურესი, თ. ჯ. და სხვები მამაკაცები ამცირებენ სიცოცხლის ხანგრძლივობას C. elegans ჰერმაფროდიტები გამოყოფილი ნაერთების მეშვეობით. მეცნიერება 343, 541–544 (2014).

აპრისონი, ე.ზ. & amp Ruvinsky, I. სქესობრივი ანტაგონისტური მამრობითი სიგნალები მანიპულირებენ ჩანასახების და სომაების C. elegans ჰერმაფროდიტები. კურრი ბიოლი 26, 2827–2833 (2016).


Უყურე ვიდეოს: როგორ შევარჩიოთ სუნამო ზოდიაქოს ნიშნის მიხედვით (დეკემბერი 2021).